Vincenzo Galilei föddes omkring 1520 i Santa Maria a Monte i Arnodalen. Han var lutanist och musikteoretiker.

Efter att ha studerat i Venedig under ledning av Gioseffo Zarlino (1517-1590) återvände han till Pisa och gifte sig 1562 med den unga Giulia Ammannati (1538-1620). De barn som föddes ur deras äktenskap var Galileo (1564), Benedetto (?), Virginia (1573), Anna (?), Michelangelo (1575), Livia (1578) och kanske en yngsta dotter som hette Lena.

1574 flyttade familjen Galilei till Florens, där Vincenzo, som redan hade etablerat sig där några år tidigare, kunde fortsätta sina musikstudier framför allt tack vare hjälp från greve Giovanni Bardi (1534-1612). Bardi hade sponsrat Camerata Fiorentina (eller mer passande de’ Bardi), vars föreställningar hade fastställt den monodiska sångens överlägsenhet i förhållande till polyfoni och bidragit till den smakförändring som skulle leda till den lyriska operans födelse.

Vincenzo redogjorde för sina musikteorier främst i följande verk: Fronimo. Dialogo nel quale si contengono le vere et necessarie regole del intavolare la musica nel liuto (Venedig, 1568); Dialogo di Vincentio Galilei della musica antica et della moderna (Florens, 1581); Discorso di Vincentio Galilei intorno alle opere di Gioseffo Zarlino et altri importanti particolari attenenti alla musica (Florens, 1589).