Vincenzo Galilei 1520 körül született az Arno-völgyi Santa Maria a Monte-ban. Lutanista és zeneelméletíró volt.

Miután Velencében Gioseffo Zarlino (1517-1590) irányítása alatt tanult, visszatért Pisába, és 1562-ben feleségül vette a fiatal Giulia Ammannatit (1538-1620). Házasságukból a következő gyermekek születtek: Galilei (1564), Benedetto (?), Virginia (1573), Anna (?), Michelangelo (1575), Livia (1578) és talán a legkisebb lánya, Lena.

1574-ben a Galilei család Firenzébe költözött, ahol Vincenzo, aki néhány évvel korábban már ott telepedett le, elsősorban Giovanni Bardi gróf (1534-1612) segítségének köszönhetően folytathatta zenei tanulmányait. Bardi támogatta a Camerata Fiorentinát (vagy találóbb nevén de’ Bardi), amelynek előadásai megalapozták az egyszólamú ének felsőbbrendűségét a többszólamúsággal szemben, és hozzájárultak ahhoz az ízlésváltáshoz, amely a lírai opera megszületéséhez vezetett.

Vincenzo elsősorban a következő művekben fejtette ki zeneelméleteit: Fronimo. Dialogo nel quale si contengono le vere et necessarie regole del intavolare la musica nel liuto (Velence, 1568); Dialogo di Vincentio Galilei della musica antica et della moderna (Firenze, 1581); Discorso di Vincentio Galilei intorno alle opere di Gioseffo Zarlino et altri importanti particolari attenenti alla musica (Firenze, 1589).