Opis ogólny

Gotowe do użycia cząstki lentiwirusowe dCas9-VP64 umożliwiają natychmiastową transdukcję szerokiego zakresu linii komórkowych. Cząsteczki lentiwirusowe dCas9-VP64 wydajnie i stabilnie integrują dCas9-VP64 i kasetę oporności na blastycydynę połączoną peptydem 2A i napędzaną przez promotor EF1 alfa (EF1a-dCas9-VP64-2A-Blastycydyna) dla silnej ekspresji zarówno w dzielących się jak i nie dzielących się liniach komórkowych. Są one idealne do uniknięcia żmudnego procesu produkcji lentiwirusów i stanowią jedną z części trzyczęściowego systemu CRISPR z pojedynczymi dCas9-VP64. MS2-p65-HSF1 i wektorami ekspresji gRNA.
Aby zamówić gRNA w dowolnym formacie, kliknij tutaj

Zastosowanie

Funkcjonalna genomika/walidacja celu
– Bezstronne badania genetyczne
– Silna aktywacja transkrypcyjna w wielu liniach komórkowych
– Tworzenie linii komórkowych stabilnie wyrażających dCas9-VP64.

Cechy i korzyści

– Wysoce specyficzne i wysoce aktywne
– Zweryfikowane sekwencyjnie, wysokiej czystości cząsteczki lentiwirusowe o wysokim mianie
– Aktywacja genów poprzez aktywację transkrypcyjną, a nie nadekspresję opartą na cDNA
Dowiedz się więcej o SAM CRISPR Activators na SigmaAldrich.com/CRISPRa

Zasada

Systemy CRISPR/Cas są wykorzystywane przez bakterie i archaidy jako obrona przed inwazyjnymi wirusami i plazmidami. Ostatnio, system CRISPR/Cas typu II z bakterii Streptococcus pyogenes został przystosowany do funkcjonowania w systemach eukariotycznych przy użyciu dwóch składników molekularnych: pojedynczego białka Cas9 i niekodującego RNA prowadzącego (gRNA). Endonukleaza Cas9 może być unieczynniona (dCas9) poprzez mutacje w dwóch domenach białkowych, RuvC i HnH (odpowiednio D10A i H840A), które są odpowiedzialne za aktywność nukleazy. Białko pozbawione nukleazy może być następnie sprzężone z aktywatorem transkrypcyjnym VP64 i użyte w połączeniu z RNA prowadzącym zmodyfikowanym aptamerami MS2 RNA, które działają w celu rekrutacji dodatkowych koaktywatorów transkrypcyjnych p65 i HSF1. Złożony kompleks SAM jest następnie używany jako system dostarczania ładunku do docelowych promotorów genów, umożliwiając specyficzną dla danego miejsca aktywację transkrypcyjną interesującego nas genu.

Definicja jednostki

VP/mL jest jednostką miary stężenia dla miana wirusa szacowanego za pomocą testu p24.