Articles

Biochemical and pharmacological study of venom of the wolf spider Lycosa singoriensis

ORIGINAL PAPER

Biochemiczne i farmakologiczne badania jadu pająka wilka Lycosa singoriensis

Liu ZHI; Qian WII; Li JI; Zhang YI; Liang SI

ICollege of Life Sciences, Hunan Normal University, Changsha, China
IIAdministrative Center for Basic Research, Ministry of Science ant Technology, China

Correspondence to

ABSTRACT

Pająk wilk Lycosa singoriensis jest dużym i jadowitym pająkiem występującym w północno-zachodnich Chinach. Podobnie jak inne jady pająków, jad pająka wilka jest chemicznym koktajlem. Jego zawartość białka wynosi 0,659 mg białka/mg surowego jadu, co oznaczono metodą Lowry’ego. Analiza MALDI-TOF wykazała, że peptydy jadu są bardzo zróżnicowane i można je podzielić na trzy grupy charakteryzujące się trzema niezależnymi zakresami molekularnymi: odpowiednio od 2,000 do 2,500 Da, od 4,800 do 5,500 Da i od 7,000 do 8,000 Da. Taki rozkład molekularny różni się zasadniczo od rozkładu w większości dotychczas badanych jadów pająków. Jad pająka wilka ma niskie działanie neurotoksyczne na myszy, ale może wywoływać hemolizę ludzkich erytrocytów. Ponadto, jad wykazuje aktywność przeciwdrobnoustrojową wobec komórek prokariotycznych i eukariotycznych.

Słowa kluczowe: pająk, Lycosa singoriensis, surowy jad, MALDI-TOF, aktywność przeciwdrobnoustrojowa.

WPROWADZENIE

Istnieje około 39 000 opisanych gatunków pająków, a jeszcze większa liczba czeka na scharakteryzowanie. Prawie wszystkie pająki są drapieżnikami i posiadają gruczoły jadowe. Podstawowym zadaniem jadów pająków jest zabijanie lub paraliżowanie ofiar. Jady pająków są złożonymi koktajlami chemicznymi, w których peptydy są głównymi składnikami większości jadów pająków, z wyjątkiem jadów pająków czarnych wdów, które zawierają dużą ilość, powyżej 100 kD, białek (1-3). Peptydy jadu pająka są produkowane w sposób kombinatoryczny, co prowadzi do szacunkowej liczby około 1,5 miliona peptydów jadu pająka. W związku z tym, jady pająków są bogatym źródłem farmakologicznie i agrochemicznie interesujących nowych związków, które w ostatnich latach cieszą się rosnącym zainteresowaniem farmakologów i biochemików. Jednakże, w ciągu ostatnich dziesięcioleci, tylko kilka jadów pająków było badanych wystarczająco szczegółowo, a zatem mniej niż 0,01% peptydów jadu pająków zostało zidentyfikowanych do tej pory (4-7).

Pająk wilk Lycosa singoriensis jest dużym pająkiem występującym w północno-zachodnich Chinach. Dorosła samica pająka ma długość ciała od 28 do 40 mm (35±6 mm) i masę ciała od 2,6 do 7 g (ryc. 1). Ten włochaty pająk żyje w norach pod ziemią. Jego nora, wyłożona jedwabną rurką, ma średnicę od 2 do 4 cm i długość od 30 do 60 cm, a wejście do nory często pokryte jest jedwabną siatką. Pająk spędza dzień skulony na dnie nory, natomiast w nocy wchodzi na jedwabną rurkę i chowa się w pobliżu wejścia do nory, czekając na ofiarę. Po upolowaniu ofiary pająk wnosi ją do nory. W wielu przypadkach na dnie nory znajdują się resztki małych owadów. Jadowitym i agresywnym pająkiem jest również pająk wilk Lycosa singoriensis. W 2000 r. odnotowano przypadki ukąszeń ludzi i innych zwierząt przez pająka wilka w północnej części prowincji Xinjiang. Zgodnie z zapisami klinicznymi, większość ukąszeń pająków powodowała widoczne efekty, w tym czerwone ślady i ból wokół miejsc ukąszenia (8, 9).

W niniejszym opracowaniu opisujemy biochemiczne i farmakologiczne właściwości jadu pająka wilka Lycosa singoriensis. W porównaniu z wieloma innymi badanymi dotychczas jadami pająków, jad tego pająka ma pewne odrębne właściwości, co czyni go użytecznym źródłem do badania wiodących leków oraz do badania bioróżnorodności peptydów jadu pająka.

MATERIAŁY I METODY

Pająki i zbieranie jadu

Dorosłe samice pająków Lycosa singoriensis zostały zebrane w prowincji Xinjiang w Chinach, utrzymywane w plastikowych wiaderkach, które były przykryte plastikowymi siatkami i codziennie otrzymywały wodę. Do karmienia zwierząt używano posiekanych wątróbek wieprzowych i robaków. Podobnie jak wiele innych dużych pająków (10, 7), Lycosa singoriensis łatwo staje się agresywny, gdy zostanie sprowokowany kawałkiem plastikowej rurki. Chwytają one mocno rurkę, a następnie ich kły jadowe przebijają rurkę i wstrzykują do środka jad. W ten sposób unika się stymulacji elektrycznej, która może zanieczyścić jad enzymami pochodzącymi zarówno ze śliny, jak i płynów trawiennych. Zastosowanie tej metody pozwoliło uzyskać około 50 mg jadu z około 300 pająków Lycosa singoriensis, co umożliwiło zbadanie biochemicznych i farmakologicznych właściwości jadu tego pająka. Surowy jad jest klarowną i bezbarwną cieczą, łatwo rozpuszczalną w wodzie i był zbierany co dwa tygodnie. Liofilizowany surowy jad był przechowywany w temperaturze -20°C przed analizą.

SDS-PAGE Analysis of Crude Venom

Sodium dodecyl sulfate polyacrylamide gel electrophoresis (SDS-PAGE) on the collected venom was performed under denatured conditions in a 10% polyacrylamide slab gel. Do elektroforezy użyto stu mikrogramów liofilizowanego jadu, a rozdzielone białka w żelu wizualizowano barwnikiem G250.

Analiza surowego jadu metodą MALDI-TOF

Odcisk palca surowego jadu określono przy użyciu spektrometrii masowej MALDI-TOF (Voyager-DE STR Biospectometry® workstation, Applied Biosystems, USA). Jonizację uzyskano poprzez napromieniowanie laserem azotowym (337 nm) przy napięciu przyspieszającym 20-kV; jako matrycę zastosowano kwas α-cyjano-4-hydroksy-cynamonowy (CCA).

Wpływ surowego jadu na izolowane preparaty nerwowo-synaptyczne

Trzy rodzaje izolowanych preparatów nerwowo-synaptycznych – nerw przeponowy myszy, naczynia krwionośne szczura i serce ropuchy – zostały użyte do zbadania aktywności farmakologicznej surowego jadu. Eksperymenty z preparatami nerwu przeponowego myszy przeprowadzono według Bülbringa (11). Testy na żyłę główną i serce ropuchy wykonano zgodnie z Liang et al. (12).

Atesty hemolityczne

Aktywność hemolityczną surowego jadu badano z heparynizowanymi ludzkimi czerwonymi krwinkami, przepłukanymi trzykrotnie w 5 mL buforowanego fosforanami roztworu soli (PBS – 50 mM NaH2PO4 i 150 mM NaCl, pH 7,2) i odwirowywano przez 5 minut przy 3000 rpm. Następnie krwinki czerwone inkubowano w temperaturze pokojowej przez 1 godzinę w wodzie dejonizowanej (kontrola pozytywna), w PBS (próba ślepa) lub z jadem w różnych stężeniach (3,1 do 20 mg/mL) w PBS. Próbki odwirowywano przy 12 000 obr/min przez 5 minut. Supernatant oddzielano od osadu, a jego absorbancję mierzono przy 570 nm.

Antimicrobial Activity of Crude Venom

Sześć bakterii (Bacillus cereus, Corynebacterium glutamicum, Bacillus subtilis, Micrococcus luteus, Staphylococcus albus i E. coli DH5) i dwa grzyby (Saccaromyces cerevisae i Candida albicans) hodowano odpowiednio w podłożu hodowlanym do osiągnięcia fazy wykładniczej z absorbancją przy 600 nm od 0,3 do 0,8. Pięćdziesiąt mikrolitrów pożywki rozprowadzono równomiernie na trzech zestalonych płytkach agarowych. Płytki uzupełniono 1,5% agarozą/medium wylanym na sterylne płytki Petriego o wymiarach 100 × 20 mm. Płytki przykryto bibułą filtracyjną o średnicy 6 mm. Pięć mikrolitrów roztworu jadu, w normalnym roztworze soli fizjologicznej, o różnych stężeniach, umieszczano na bibule filtracyjnej. Po inkubacji w temperaturze 37°C przez noc, efekty działania surowego jadu były rejestrowane jako wyraźne kręgi w trawniku bakteryjnym na bibule filtracyjnej.

W związku z tym, w tej próbie biologicznej, roztwory surowego jadu w różnych stężeniach (3 mg/mL, 6 mg/mL i 12 mg/mL) były upuszczane na bibułę filtracyjną, a wyraźny krąg był wykrywalny na bibule, jeśli jad w tym stężeniu hamował wzrost drobnoustrojów.

WYNIKI I DYSKUSJA

Charakterystyka biochemiczna surowego jadu

Okazało się, że każdy miligram surowego jadu zawiera około 0,659 mg białka/peptydów. Jak pokazano na Rysunku 2, białka o wysokiej masie cząsteczkowej surowego jadu są rozmieszczone głównie wśród mas cząsteczkowych w zakresie od 14 do 31,000 Da, z grubym pasmem białka w pobliżu 20,000 Da i innym pasmem widocznym w pobliżu 14,000 Da. Grube pasmo jest również widoczne w górnej części panelu żelu SDS-PAGE, który składa się z peptydów o masie cząsteczkowej mniejszej niż 10,000 Da. Białka/peptydy rozmieszczone w dwóch grubych wiązaniach są najobficiej występującymi składnikami surowego jadu, które odpowiadają 80% składnika białkowego surowego jadu.

W ostatnim czasie, spektrometria mas MALDI-TOF została zastosowana do wyjaśnienia złożoności peptydów jadu. Dodatkowo, wraz z szybkim rozwojem spektrometrii mas, technologia ta została szeroko wykorzystana w badaniach nad jadami (5, 13). Na przykład, Pierre Escoubas i wsp. (5) stworzyli obraz jadu, aby zrozumieć złożoność jadów australijskich pająków z rodziny lejkowcowatych, stosując kombinację cDNA i spektrometrii mas. Ich badania wykazały, że jady tych pająków zawierają wiele setek peptydów, których rozkład jest dwumodalny, z większością peptydów w zakresie mas od 3,000 do 5,000 Da i drugą, mniej wyraźną grupą w zakresie od 6,500 do 8,500 Da. Taki rozkład mas cząsteczkowych jest analogiczny do tego, który zaobserwowano wcześniej dla dużej liczby jadów tarantuli (4). Podobne wyniki uzyskano również w naszych poprzednich badaniach nad jadami chińskich tarantul Ornithoctonus huwena, Ornithoctonus hainana i Chilobrachys jingzhao (14-16).

Jak przedstawiono na rycinie 3, analiza spektrometrii MALDI-TOF surowego jadu Lycosa singoriensis wykazuje, że rozkład mas cząsteczkowych jest analogiczny w zakresie od 1,000 do 10,000 Da. Jednak w odróżnieniu od wyżej wymienionych gatunków, peptydy jadu Lycosa singoriensis można podzielić na trzy grupy ze względu na ich masę. Pierwsza grupa obejmuje peptydy o masach cząsteczkowych pomiędzy 2000 a 2500 Da, co wskazuje, że posiadają one około 20 reszt aminokwasowych. Ten zakres mas cząsteczkowych jest rzadko obserwowany w większości badanych do tej pory jadów pająków. Druga grupa obejmuje głównie peptydy o masach cząsteczkowych w zakresie od 4,800 do 5,500 Da, co sugeruje, że składają się one z około 50 reszt aminokwasowych. Trzecią grupę stanowią peptydy o masach w zakresie od 7000 do 8000 Da, co odpowiada ponad 60 resztom aminokwasowym. Szacuje się, że peptydy rozmieszczone w tych dwóch ostatnich grupach stanowią większość peptydów jadu.

Co ciekawe, raczej niewiele peptydów ma masy cząsteczkowe w przedziale od 3000 do 5000 Da. Paradoksalnie, peptydy w tym zakresie mas są najobficiej występującym składnikiem w wielu innych jadach pająków. Wyjaśnienie tych rozbieżności wymaga dalszych badań, które mogą przyczynić się do zrozumienia mechanizmu ewolucji peptydów jadu pająków. Obecne badania przyczyniają się do udowodnienia, że peptydy Lycosa singoriensis są wysoce zróżnicowane.

Analiza bibliotek cDNA gruczołów jadowych dostarczyła ponad 200 sekwencji toksynopodobnych peptydów. Rozkład mas tych peptydów pochodzących z sekwencji cDNA jest zgodny z rozkładem obserwowanym za pomocą spektrometrii MALDI-TOF. Ponadto, analiza sekwencji wykazała, że peptydy z pierwszej grupy nie posiadają reszt cysteinowych, a peptydy z drugiej grupy zawierają 4 lub 5 wiązań disulfidowych, natomiast peptydy z ostatniej grupy posiadają więcej niż 5 wiązań disulfidowych (dane niepublikowane). Większość zidentyfikowanych do tej pory pajęczych toksyn peptydowych posiada zazwyczaj 3 lub 4 wiązania disulfidowe, a ich struktury 3D przyjmują klasyczny motyw węzła cystynowego inhibitora. W związku z tym istnieją podstawy, aby sądzić, że niektóre peptydy z jadu Lycosa singoriensis mogą posiadać nowy motyw strukturalny.

Pharmacological Characterization of Crude Venom

Surowy jad, w wysokiej dawce 200 µg/mL, nie mógł zablokować elektrycznie stymulowanego skurczu preparatu przepony z nerwu przeponowego myszy (n = 5). Wykazano również niewielki wpływ na odpowiedź skurczową naczyniówki szczura. Stężenie 200 µg/mL surowego jadu mogło tylko częściowo hamować odpowiedź skurczową przez 20 minut (n = 5) (Rysunek 4 – A). W przeciwieństwie do tego, surowy jad pająka O. huwena, w tym samym stężeniu, był w stanie szybko zablokować odpowiedź skurczową w tym samym preparacie nerwowo-przeponowym lub w naczyniach dolnych szczura (dane nie pokazane). Natomiast surowy jad Lycosa singoriensis miał znaczący wpływ na skurcz serca ropuchy. W obecności 100 µg/mL surowego jadu, tempo i wielkość bicia serca były silnie zwiększone (n = 5) (Rysunek 4 – B). Sugeruje to, że surowy jad zawiera pewne związki, które są kardiotoniczne.


Obecnie środki kardiotoniczne są klasyfikowane do trzech klas w oparciu o ich subkomórkowe mechanizmy działania, a mianowicie środki działające poprzez mechanizmy upstream (mobilizatory Ca2+), jak również mechanizmy centralne i downstream (sensybilizatory Ca2+). Środki te wywołują dodatni efekt inotropowy poprzez podwyższenie wewnątrzkomórkowego stężenia jonów Ca2+ (17). Dotychczas nie ma doniesień o kardiotonicznym działaniu jadów pająków wilka, a jednocześnie nie oczyszczono i nie scharakteryzowano związków kardiotonicznych z tych jadów. Dlatego ważne jest zbadanie związków kardiotonicznych z jadu Lycosa singoriensis.

Aktywność hemolityczna surowego jadu została określona przy użyciu świeżych ludzkich erytrocytów. Jak pokazano na Rysunku 5 (A), surowy jad niszczył ludzkie erytrocyty w sposób zależny od dawki. Jego efektywne stężenie 50% inhibicji (EC50) wynosi 1,25 mg/mL.

Jak podali Budnik et al. (18), surowy jad Lycosa singoriensis zawiera peptydy przeciwdrobnoustrojowe (nazwane likocytynami 1, 2 i 3), które mogą hamować wzrost bakterii gram-dodatnich i gram-ujemnych oraz grzybów w stężeniach mikromolarnych. Przetestowaliśmy zatem aktywność przeciwdrobnoustrojową surowego jadu wobec komórek prokariotycznych i eukariotycznych za pomocą testu hamowania wzrostu na płytkach. W warunkach naszego testu biologicznego najbardziej wrażliwe na surowy jad były szczepy komórkowe Bacillus subtilis i Staphylococcus sp, których wzrost był silnie hamowany przy stężeniu 3 mg/mL. Jad działał również silnie wobec Corynebacterium glutamicum i Micrococcus luteus, ale słabo wobec jednego ze szczepów grzybów (Candida albicans). Jednakże, surowy jad nie miał wykrywalnego wpływu na E. coli i Saccaromyces cerevisae nawet w wysokim stężeniu 12 mg/mL (Rysunek 5 – B).

W ciągu ostatnich dziesięciu lat zidentyfikowano wiele peptydów przeciwdrobnoustrojowych z jadów pająków. Likotoksyny I i II zostały zidentyfikowane z jadu pająka wilka Lycosa carolinensis. Obie są liniowymi peptydami przeciwdrobnoustrojowymi, które wykazują charakter amfipatycznej helisy α typowej dla peptydów tworzących pory. Ich mechanizm porotwórczy został dodatkowo zweryfikowany przez promowanie przez nie odpływu jonów wapnia z synaptosomów (19). Po likotoksynach, aktywność przeciwdrobnoustrojową wykazały również cupienniny (20-22) i oksyopininy (23, 24), pochodzące odpowiednio z jadu pająków wilczych Cupiennus salei i Oxyopes kitabensis. Ostatnio z jadu pająka Lachesana tarabaevi oczyszczono siedem nowych, krótkich, liniowych peptydów o działaniu przeciwdrobnoustrojowym i cytolitycznym, nazwanych latarynami. Ponadto, pięć nowych peptydów, które wykazują znaczne podobieństwo strukturalne do oczyszczonych lataryn, zostało przewidzianych w bazie danych expressed sequence tag dla gruczołu jadowego pająka (25).

Te peptydy z jadu pająka należą do liniowych kationowych α-helikalnych peptydów przeciwdrobnoustrojowych. Ta klasa peptydów przeciwdrobnoustrojowych posiada pewne wspólne cechy, takie jak hamowanie wzrostu mikroorganizmów w niskich stężeniach mikromolarnych oraz tworzenie amfipatycznych i kationowych formacji helikalnych w środowiskach hydrofobowych. W ciągu ostatnich dziesięcioleci odkryto dużą liczbę peptydów przeciwdrobnoustrojowych, w tym liniowe kationowe α-helikalne peptydy przeciwdrobnoustrojowe, zarówno u zwierząt, jak i u roślin. Peptydy te składają się zwykle z 12 do 45 aminokwasów i odgrywają ważną rolę we wrodzonych układach odpornościowych większości organizmów żywych (26-28). Większość z nich może zabijać mikroorganizmy z następującymi czterema cechami: selektywną toksycznością, szybkim zabijaniem, szerokim spektrum przeciwdrobnoustrojowym i brakiem rozwoju oporności (29-31).

Podsumowując, donosimy o nowych biochemicznych i farmakologicznych odkryciach dotyczących jadu pająka wilka Lycosa singoriensis. Odrębne właściwości peptydów tego jadu czynią go idealnym modelem do badania mechanizmów ewolucji peptydów jadu pająków. Badania farmakologiczne tego jadu są pomocne w oczyszczaniu i charakteryzowaniu bioaktywnych peptydów w dalszych badaniach.

ACKNOWLEDGMENTS

This work was supported by National Science Foundation Projects (30430170 and 30700127).

1. Corzo G, Escoubas P. Pharmacologically active spider peptide toxins. Cell Mol Life Sci. 2003;60(11):2409-26.

2. Escoubas P. Molecular diversification in spider venoms: a web of combinatorial peptide libraries. Mol Divers. 2006;10(4):545-54.

3. King GF. The wonderful world of spiders: preface to the special Toxicon issue on spider venoms. Toxicon. 2004;43(5):471-5.

4. Escoubas P, Rash L. Tarantulas: eight-legged pharmacists and combinatorial chemists. Toxicon. 2004;43(5):555-74.

5. Escoubas P, Sollod B, King GF. Venom landscapes: mining the complexity of spider venoms via a combined cDNA and mass spectrometric approach. Toxicon. 2006;47(6):650-63.

6. Sollod BL, Wilson D, Zhaxybayeva O, Gogarten JP, Drinkwater R, King GF. Were arachnids the first to use combinatorial peptide libraries? Peptides. 2005;26(1):131-9.

7. Tedford HW, Sollod BL, Maggio F, King GF. Australian funnel-web spiders: master insecticide chemists. Toxicon. 2004;43(5):601-18.

8. Lu DL, Zhang DF. Two kinds of poisonous spiders in Xinjiang and prevention and cure for the spider bite. Chin J Zool. 2001;36(5):40-2.

8. Initial observation on living habit of Lycosa singorensis. Chin J Zool. 2004;39:63-7.

10. Liu Z, Dai J, Dai L, Deng M, Hu Z, Hu W, Liang S. Function and solution structure of huwentoxin-X, a specific blocker of N-type calcium channels, from the Chinese bird spider Ornithoctonus huwena. J Biol Chem. 2006;281(13):8628-35.

11. Bulbring E. Observations on the isolated phrenic nerve diaphragm preparation of the rat. Br J Pharmacol Chemother. 1946;1(1):38-61.

12. Liang SP, Chen XD, Shu Q, Zhang Y, Peng K. The presynaptic activity of huwentoxin-I, a neurotoxin from the venom of the Chinese bird spider Selenocosmia huwena. Toxicon. 2000;38(9):1237-46.

13. Guette C, Legros C, Tournois G,Goyffon M, Célérier ML. Peptide profiling by matrix-assisted laser desorption/ionisation time-of-flight mass spectrometry of the Lasiodora parahybana tarantula venom gland. Toxicon. 2006;47(6):640-9.

14. Liang S. An overview of peptide toxins from the venom of the Chinese bird spider Selenocosmia huwena Wang . Toxicon. 2004;43(5):575-85.

15. Liao Z, Cao J, Li S, Yan X, Hu W, He Q, Chen J, Tang J, Xie J, Liang S. Proteomic and peptidomic analysis of the venom from Chinese tarantula Chilobrachys jingzhao. Proteomics. 2007;7(11):1892-907.

16. Yuan C, Jin Q, Tang X, Hu W, Cao R, Yang S, Xiong J, Xie C, Xie J, Liang S. Proteomic and peptidomic characterization of the venom from the Chinese bird spider, Ornithoctonus huwena Wang. J Proteome Res. 2007;6(7):2792-801.

17. Endoh M. A Na+ channel agonist: a potential cardiotonic agent with a novel mechanism? Br J Pharmacol. 2004;143(6):663-5.

18. Budnik BA, Olsen JV, Egorov TA, Anisimova VE, Galkina TG, Musolyamov AK, Grishin EV, Zubarev RA. De novo sequencing of antimicrobial peptides isolated from the venom glands of the wolf spider Lycosa singoriensis. J Mass Spectrom. 2004;39(2):193-201.

19. Yan L, Adams ME. Lycotoxins, antimicrobial peptides from venom of the wolf spider Lycosa carolinensis. J Biol Chem. 1998;273(4):2059-66.

20. Kuhn-Nentwig L, Dathe M, Walz A, Schaller J, Nentwig W. Cupiennin 1d: the cytolytic activity depends on the hydrophobic N-terminus and is modulated by the polar C-terminus. FEBS Lett. 2002;527(1-3):193-8.

21. Kuhn-Nentwig L, Muller J, Schaller J, Walz A, Dathe M, Nentwig W. Cupiennin 1, a new family of highly basic antimicrobial peptides in the venom of the spider Cupiennius salei (Ctenidae). J Biol Chem. 2002;277(13):11208-16.

22. Pukala TL, Doyle JR, Llewellyn LE, Kuhn-Nentwig L, Apponyi MA, Separovic F, Bowie JH. Cupiennin 1a, an antimicrobial peptide from the venom of the neotropical wandering spider Cupiennius salei, also inhibits the formation of nitric oxide by neuronal nitric oxide synthase. FEBS J. 2007;274(7):1778-84.

23. Corzo G, Villegas E, Gomez-Lagunas F, Possani LD, Belokoneva OS, Nakajima T. Oxyopinins, large amphipathic peptides isolated from the venom of the wolf spider Oxyopes kitabensis with cytolytic properties and positive insecticidal cooperativity with spider neurotoxins. J Biol Chem. 2002;277(26):23627-37.

24. Nomura K, Corzo G. The effect of binding of spider-derived antimicrobial peptides, oxyopinins, on lipid membranes. Biochim Biophys Acta. 2006;1758(9):1475-82.

25. Kozlov SA, Vassilevski AA, Feofanov AV, Surovoy AY, Karpunin DV, Grishin EV. Latarcins, antimicrobial and cytolytic peptides from the venom of the spider Lachesana tarabaevi (Zodariidae) that exemplify biomolecular diversity. J Biol Chem. 2006;281(30):20983-92.

26. Brogden KA. Antimicrobial peptides: pore formers or metabolic inhibitors in bacteria? Nat Rev Microbiol. 2005;3(3):238-50.

27. Brown KL, Hancock RE. Cationic host defense (antimicrobial) peptides. Curr Opin Immunol. 2006;18(1):24-30.

28. Zasloff M. Antimicrobial peptides of multicellular organisms. Nature. 2002;415(6870):389-95.

29. Matsuzaki K. Dlaczego i jak interakcje peptydowo-lipidowe są wykorzystywane do samoobrony? Magainins and tachyplesins as archetypes. Biochim Biophys Acta. 1999;1462(1-2):1-10.

30. Mcphee JB, Hancock RE. Function and therapeutic potential of host defence peptides. J Pept Sci. 2005;11(11):677-87.

31. Mookherjee N, Hancock RE. Cationic host defence peptides: innate immune regulatory peptides as a novel approach for treating infections. Cell Mol Life Sci. 2007;64(7-8):922-33.

Correspondence to:
Songpiing Liang
College of Life Sciences, Hunan Normal University
Changsha, Hunan, 410081, China.
Phone: +86 731 8872556. Fax: +86 731 8861304.
Email: [email protected].