Descrizione generale

Le particelle lentivirali dCas9-VP64 pronte all’uso permettono la trasduzione immediata di una vasta gamma di linee cellulari. Le particelle lentivirali dCas9-VP64 integrano in modo efficiente e stabile dCas9-VP64 e la cassetta di resistenza alla blasticidina legata da un peptide 2A e guidata dal promotore EF1 alpha (EF1a-dCas9-VP64-2A-Blasticidin) per una forte espressione sia in linee cellulari in divisione che non in divisione. Sono ideali per evitare il noioso processo di produzione di lentivirus e sono una parte di un sistema CRISPR a tre parti con dCas9-VP64 individuale. MS2-p65-HSF1 e vettori di espressione gRNA.
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Applicazione

Genomica funzionale/convalida del target
– Screening genetico imparziale
– Forte attivazione trascrizionale in linee cellulari multiple
– Creazione di linee cellulari che esprimono stabilmente dCas9-VP64.

Caratteristiche e benefici

– Altamente specifico e altamente attivo
– Particelle lentivirali ad alta purezza e alto titolo verificate per sequenza
– Attiva i geni attraverso l’attivazione trascrizionale piuttosto che la sovraespressione basata sul cDNA
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Principio

I sistemi CRISPR/Cas sono impiegati da batteri e archei come difesa contro virus e plasmidi invasori. Recentemente, il sistema CRISPR/Cas di tipo II del batterio Streptococcus pyogenes è stato ingegnerizzato per funzionare in sistemi eucariotici usando due componenti molecolari: una singola proteina Cas9 e un RNA guida non codificante (gRNA). L’endonucleasi Cas9 può essere resa inattiva (dCas9) con mutazioni ai due domini proteici, RuvC e HnH (rispettivamente D10A e H840A), che sono responsabili dell’attività della nucleasi. La proteina carente di nucleasi può quindi essere fusa con l’attivatore trascrizionale VP64 e utilizzata insieme a un RNA guida modificato con aptameri di RNA MS2 che funzionano per reclutare i coattivatori trascrizionali aggiuntivi p65 e HSF1. Il complesso SAM assemblato viene quindi utilizzato come sistema di consegna del carico ai promotori del gene bersaglio, consentendo l’attivazione trascrizionale sito-specifica del gene di interesse.

Unità Definizione

VP/mL è l’unità di misura della concentrazione per il titolo virale stimato dal test p24.