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Caratterizzazione molecolare di xynX, un gene che codifica una xilanasi multidominio con un dominio termostabilizzante da Clostridium thermocellum

Un gene di Clostridium thermocellum, xynX, che codifica per una xilanasi è stato clonato e la sequenza nucleotidica completa è stata determinata. Il gene della xilanasi di Clostridium thermocellum consiste in una ORF di 3261 nucleotidi che codifica una xilanasi (XynX) di 1087 residui di aminoacidi (116 kDa). L’analisi della sequenza di XynX ha mostrato una struttura multidominio che consiste di quattro diversi domini: un dominio termostabilizzante N-terminale omologo a sequenze trovate in diversi enzimi termofili, un dominio catalitico omologo alle idrolasi glicosiliche della famiglia 10, un dominio legante la cellulosa duplicato (CBD) omologo ai CBD della famiglia IX, e un dominio omologo allo strato S triplicato. Un mutante di delezione di xynX che ha solo la regione catalitica ha prodotto un enzima mutante XynX-C che ha mantenuto l’attività catalitica ma ha perso la termostabilità. In termini di emivita a 70 °C, la termostabilità di XynX-C era circa sei volte inferiore a quella dell’altro enzima mutante, XynX-TC, prodotto da un mutante contenente sia il dominio termostabilizzante che il dominio catalitico. La temperatura ottimale di XynX-C era di circa 5-10 °C inferiore a quella di XynX-TC.