TY – JOUR

T1 – Base strutturale del legame del substrato in WsaF, una rhamnosiltransferasi da Geobacillus stearothermophilus

AU – Steiner, Kerstin

AU – Hageluken, Gregor

AU – Messner, Paul

AU – Schaeffer, Christina

AU – Naismith, James Henderson

PY – 2010/3/26

Y1 – 2010/3/26

N2 – I polimeri di carboidrati sono importanti a livello medico e industriale. Lo strato S di molti organismi Gram-positivi comprende polimeri di proteine e carboidrati e forma una matrice quasi paracristallina sulla superficie cellulare. Non solo questa matrice è importante per i batteri, ma ha anche una potenziale applicazione nella produzione di polisaccaridi e glicoconiugati commercialmente importanti. Il glicano della glicoproteina dello strato S del Geobacillus stearothermophilus NRS 2004/3a è composto principalmente da unità ripetute di tre zuccheri ramnosi collegati da legami alfa-1,3, alfa-1,2 e beta-1,2. La formazione del legame beta-1,2 è catalizzata dall’enzima WsaF. L’uso razionale di questo sistema è ostacolato dal fatto che WsaF e altri enzimi nel percorso condividono pochissima omologia con altri enzimi. Riportiamo la caratterizzazione strutturale e biochimica di WsaF, la prima rhamnosyltransferase ad essere caratterizzata. Il lavoro strutturale è stato aiutato dal metodo di riduzione dell’entropia di superficie. L’enzima ha due domini, il dominio N-terminale, che lega l’accettore (la catena rhamnan crescente), e il dominio C-terminale, che lega il substrato (dTDP-beta-L-rhamnose). La struttura di WsaF legata a dTDP e dTDP-beta-L-rhamnose accoppiata all’analisi biochimica identifica i residui che sono alla base della catalisi e del riconoscimento del substrato. Abbiamo costruito e testato tramite mutagenesi sito-diretta un modello per il riconoscimento dell’accettore. (C) 2010 Elsevier Ltd. Tutti i diritti riservati.

AB – I polimeri dei carboidrati sono importanti dal punto di vista medico e industriale. Lo strato S di molti organismi Gram-positivi comprende polimeri di proteine e carboidrati e forma una matrice quasi paracristallina sulla superficie cellulare. Non solo questa matrice è importante per i batteri, ma ha anche una potenziale applicazione nella produzione di polisaccaridi e glicoconiugati commercialmente importanti. Il glicano della glicoproteina dello strato S del Geobacillus stearothermophilus NRS 2004/3a è composto principalmente da unità ripetute di tre zuccheri ramnosi collegati da legami alfa-1,3, alfa-1,2 e beta-1,2. La formazione del legame beta-1,2 è catalizzata dall’enzima WsaF. L’uso razionale di questo sistema è ostacolato dal fatto che WsaF e altri enzimi nel percorso condividono pochissima omologia con altri enzimi. Riportiamo la caratterizzazione strutturale e biochimica di WsaF, la prima rhamnosyltransferase ad essere caratterizzata. Il lavoro strutturale è stato aiutato dal metodo di riduzione dell’entropia di superficie. L’enzima ha due domini, il dominio N-terminale, che lega l’accettore (la catena rhamnan crescente), e il dominio C-terminale, che lega il substrato (dTDP-beta-L-rhamnose). La struttura di WsaF legata a dTDP e dTDP-beta-L-rhamnose accoppiata all’analisi biochimica identifica i residui che sono alla base della catalisi e del riconoscimento del substrato. Abbiamo costruito e testato tramite mutagenesi sito-diretta un modello per il riconoscimento dell’accettore. (C) 2010 Elsevier Ltd. Tutti i diritti riservati.

KW – Struttura di cristallo

KW – Geobacillus stearothermophilus

KW – Rhamnosyltransferase

KW – S-layer protein glycosylation

KW – Glycoprotein glycan Biosynthesis

KW – Mannosyltreansferase pima

KW – Glicogeno-Sintetasi

KW – Dati di diffrazione

KW – Gene-cluster

KW – Famiglia GT4

KW – Glicosiltrasferasi

KW – Catalisi

KW – Sequenza

UR – http://www.scopus.com/inward/record.url?scp=77349090654&partnerID=8YFLogxK