Articles

Molekylär karakterisering av xynX , en gen som kodar för ett flerdomänigt xylanas med en termostabiliserande domän från Clostridium thermocellum

En gen från Clostridium thermocellum, xynX, som kodar för ett xylanas, har klonats och den kompletta nukleotidsekvensen har fastställts. Xylanasgenen hos Clostridium thermocellum består av en ORF på 3261 nukleotider som kodar för ett xylanas (XynX) med 1087 aminosyrarester (116 kDa). Sekvensanalys av XynX visade en multidomänstruktur som bestod av fyra olika domäner: en N-terminal termostabiliserande domän som är homolog till sekvenser som finns i flera termofila enzymer, en katalytisk domän som är homolog till glykosylhydrolaser i familj 10, en duplicerad cellulosabindande domän (CBD) som är homolog till CBD:er i familj IX, och en trippellikatorisk S-lagers homolog domän. En deletionsmutant av xynX med endast den katalytiska regionen gav upphov till ett mutantenzym XynX-C som bibehöll den katalytiska aktiviteten men förlorade termostabiliteten. När det gäller halveringstiden vid 70 °C var termostabiliteten hos XynX-C ungefär sex gånger lägre än hos det andra muterade enzymet, XynX-TC, som producerades av en mutant som innehöll både den termostabiliserande domänen och den katalytiska domänen. Den optimala temperaturen för XynX-C var cirka 5-10 °C lägre än för XynX-TC.