Articles

Molecular characterization of xynX, a gene encoding a multidomain xylanase with a thermostabilizing domain from Clostridium thermocellum

A Clostridium thermocellum xynX génjét, amely egy xilanázt kódol, klónozták és a teljes nukleotidszekvenciát meghatározták. A Clostridium thermocellum xilanáz génje egy 3261 nukleotidból álló ORF-ből áll, amely egy 1087 aminosavmaradékból álló (116 kDa) xilanázt (XynX) kódol. A XynX szekvenciaelemzése egy multidomén szerkezetet mutatott ki, amely négy különböző doménből áll: egy N-terminális termostabilizáló domén, amely homológ a számos termofil enzimben található szekvenciákkal, egy katalitikus domén, amely homológ a 10. családba tartozó glikozil-hidrolázokkal, egy duplikált cellulóz-kötő domén (CBD), amely homológ a IX. családba tartozó CBD-kkel, és egy triplikált S-réteg homológ domén. A xynX egy olyan deléciós mutánsa, amely csak a katalitikus régiót tartalmazta, egy XynX-C mutáns enzimet eredményezett, amely megtartotta a katalitikus aktivitást, de elvesztette termosztabilitását. A 70 °C-on mért felezési idő tekintetében a XynX-C termosztabilitása körülbelül hatszor kisebb volt, mint a másik mutáns enzimé, a XynX-TC-é, amelyet a termosztabilizáló domént és a katalitikus domént egyaránt tartalmazó mutáns állított elő. A XynX-C optimális hőmérséklete körülbelül 5-10 °C-kal alacsonyabb volt, mint a XynX-TC-é.