Általános leírás

A használatra kész dCas9-VP64 lentivirális részecskék a sejtvonalak széles körének azonnali transzdukcióját teszik lehetővé. A dCas9-VP64 lentivirális részecskék hatékonyan és stabilan integrálják a dCas9-VP64-et és a 2A peptiddel összekapcsolt és az EF1 alfa promóter által vezérelt blaszticidin rezisztencia kazettát (EF1a-dCas9-VP64-2A-Blasticidin) az erős expresszió érdekében osztódó és nem osztódó sejtvonalakban egyaránt. Ideálisak a fáradságos lentivírus előállítási folyamat elkerülésére, és egy háromrészes CRISPR-rendszer egyik részét képezik az egyedi dCas9-VP64-gyel. MS2-p65-HSF1 és gRNA expressziós vektorok.
A gRNS bármely formátumban történő megrendeléséhez kattintson ide

Alkalmazás

Funkcionális genomika/célpont validáció
– Elfogulatlan előre irányuló genetikai szűrés
– Erős transzkripciós aktiváció több sejtvonalon
– Stabilan dCas9-VP64-et expresszáló sejtvonalak létrehozása.

Jellemzők és előnyök

– Rendkívül specifikus és rendkívül aktív
– Szekvenciailag ellenőrzött, nagy tisztaságú, nagy titerű lentivirális részecskék
– Transzkripciós aktiválással aktiválja a géneket, nem pedig cDNS alapú túlterjedéssel
Tudjon meg többet a SAM CRISPR aktivátorokról a SigmaAldrichnál.com/CRISPRa

Elv

A CRISPR/Cas rendszereket a baktériumok és az archaikusok a behatoló vírusok és plazmidok elleni védekezésként alkalmazzák. A közelmúltban a Streptococcus pyogenes baktérium II-es típusú CRISPR/Cas rendszerét úgy alakították ki, hogy eukarióta rendszerekben is működjön, két molekuláris komponenssel: egyetlen Cas9 fehérjével és egy nem kódoló vezető RNS-szel (gRNS). A Cas9 endonukleáz inaktívvá tehető (dCas9) a nukleáz aktivitásért felelős két fehérjetartomány, a RuvC és a HnH (D10A és H840A) mutációjával. A nukleázhiányos fehérje ezután fuzionálható a VP64 transzkripciós aktivátorral, és egy MS2 RNS-aptamerekkel módosított vezető RNS-szel együtt használható, amely a további p65 és HSF1 transzkripciós koaktivátorok toborzására szolgál. Az összerakott SAM-komplexet ezután teherszállító rendszerként használják a célzott gén promóterekhez, lehetővé téve a kívánt gén helyspecifikus transzkripciós aktiválását.

Egység Meghatározás

A VP/mL a p24-teszttel becsült vírustiter koncentrációjának mértékegysége.