Articles

Molekulární charakterizace xynX , genu kódujícího multidoménovou xylanázu s termostabilizující doménou z Clostridium thermocellum

Byl klonován gen Clostridium thermocellum, xynX, kódující xylanázu, a byla určena jeho kompletní nukleotidová sekvence. Gen xylanázy Clostridium thermocellum se skládá z ORF o 3261 nukleotidech kódujícího xylanázu (XynX) o 1087 aminokyselinových zbytcích (116 kDa). Sekvenční analýza XynX ukázala multidoménovou strukturu, která se skládá ze čtyř různých domén: N-koncové termostabilizační domény homologické se sekvencemi nalezenými u několika termofilních enzymů, katalytické domény homologické s glykosylhydrolasami rodiny 10, zdvojené domény vázající celulosu (CBD) homologické s CBD rodiny IX a trojité homologické domény S-vrstvy. Deleční mutant xynX, který má pouze katalytickou oblast, vytvořil mutantní enzym XynX-C, který si zachoval katalytickou aktivitu, ale ztratil termostabilitu. Z hlediska poločasu rozpadu při 70 °C byla termostabilita enzymu XynX-C přibližně šestkrát nižší než u druhého mutantního enzymu XynX-TC, který vznikl mutantem obsahujícím termostabilizační doménu i katalytickou doménu. Optimální teplota XynX-C byla asi o 5-10 °C nižší než teplota XynX-TC.

.