Obecný popis

Lentivirální částice dCas9-VP64 připravené k použití umožňují okamžitou transdukci široké škály buněčných linií. Lentivirové částice dCas9-VP64 účinně a stabilně integrují kazetu rezistence dCas9-VP64 a blasticidinu spojenou peptidem 2A a řízenou promotorem EF1 alfa (EF1a-dCas9-VP64-2A-Blasticidin) pro silnou expresi v dělících se i nedělících se buněčných liniích. Jsou ideální pro vyhnutí se zdlouhavému procesu výroby lenviru a jsou jednou částí třídílného systému CRISPR s jednotlivými dCas9-VP64. Expresní vektory MS2-p65-HSF1 a gRNA.
Pro objednání gRNA v jakémkoli formátu klikněte zde

Použití

Ověření funkční genomiky/cíle
– Nezkreslený dopředný genetický screening
– Silná transkripční aktivace v mnoha buněčných liniích
– Vytvoření buněčných linií stabilně exprimujících dCas9-VP64.

Vlastnosti a výhody

– Vysoce specifické a vysoce aktivní
– Sekvenčně ověřené lentivirové částice s vysokou čistotou a vysokým titrem
– Aktivuje geny spíše prostřednictvím transkripční aktivace než nadměrnou expresí na bázi cDNA
Zjistěte více o aktivátorech SAM CRISPR u společnosti SigmaAldrich.com/CRISPRa

Princip

Systémy CRISPR/Cas využívají bakterie a archea jako obranu proti napadení viry a plazmidy. Nedávno byl systém CRISPR/Cas typu II z bakterie Streptococcus pyogenes upraven tak, aby fungoval v eukaryotických systémech pomocí dvou molekulárních komponent: jednoho proteinu Cas9 a nekódující vodicí RNA (gRNA). Endonukleázu Cas9 lze učinit neaktivní (dCas9) pomocí mutací dvou proteinových domén, RuvC a HnH (D10A, resp. H840A), které jsou zodpovědné za nukleázovou aktivitu. Nukleázově deficientní protein lze poté spojit s transkripčním aktivátorem VP64 a použít jej ve spojení s vodicí RNA modifikovanou RNA aptamery MS2, které fungují tak, že rekrutují další transkripční koaktivátory p65 a HSF1. Sestavený komplex SAM se pak používá jako systém pro doručení nákladu do promotorů cílových genů, což umožňuje transkripční aktivaci zájmového genu v daném místě.

Definice jednotky

VP/ml je koncentrační měrná jednotka pro virový titr odhadovaný pomocí testu p24.