ORIGINAL PAPER

Biochemické a farmakologické studium jedu vlčího pavouka Lycosa singoriensis

Liu ZHI; Qian WII; Li JI; Zhang YI; Liang SI

ICollege of Life Sciences, Hunan Normal University, Changsha, China
IIAdministrative Center for Basic Research, Ministry of Science ant Technology, China

Korespondence

ABSTRACT

The wolf spider Lycosa singoriensis is a large and venomous spider distributed throughout northwestern China. Stejně jako jed jiných pavouků je i jed vlčího pavouka chemickým koktejlem. Jeho obsah bílkovin je 0,659 mg bílkovin/mg surového jedu stanovený Lowryho metodou. Analýza MALDI-TOF odhalila, že peptidy jedu jsou velmi rozmanité a lze je rozdělit do tří skupin charakterizovaných třemi nezávislými molekulárními rozsahy: 2 000 až 2 500 Da, 4 800 až 5 500 Da a 7 000 až 8 000 Da. Toto molekulární rozdělení se podstatně liší od rozdělení většiny dosud studovaných pavoučích jedů. Tento jed vlčího pavouka má nízký neurotoxický účinek na myši, ale může vyvolat hemolýzu lidských erytrocytů. Navíc jed vykazuje antimikrobiální aktivitu vůči prokaryotickým a eukaryotickým buňkám.

Klíčová slova: pavouk, Lycosa singoriensis, surový jed, MALDI-TOF, antimikrobiální aktivita.

ÚVOD

Existuje asi 39 000 popsaných druhů pavouků, přičemž ještě větší počet čeká na charakterizaci. Téměř všichni pavouci jsou predátoři a mají jedové žlázy. Primárním návrhem pavoučích jedů je usmrcení nebo ochromení kořisti. Pavoučí jedy jsou složité chemické koktejly, v nichž hlavní složkou většiny pavoučích jedů jsou peptidy, s výjimkou jedů pavouků černých vdov, které obsahují vysoký podíl, větší než 100 kD proteinů (1-3). Peptidy pavoučích jedů se vytvářejí kombinatoricky, což vede k odhadovanému celkovému počtu asi 1,5 milionu peptidů pavoučích jedů. Pavoučí jedy jsou proto bohatým zdrojem farmakologicky a agrochemicky zajímavých nových sloučenin, kterým farmakologové a biochemici v posledních letech věnují zvýšenou pozornost. Během posledních desetiletí však bylo dostatečně podrobně studováno pouze několik pavoučích jedů, a proto bylo dosud identifikováno méně než 0,01 % pavoučích jedových peptidů (4-7).

Vlčí pavouk Lycosa singoriensis je velký pavouk rozšířený v severozápadní Číně. Dospělá samice pavouka má délku těla od 28 do 40 mm (35±6 mm) a hmotnost těla od 2,6 do 7 g (obr. 1). Tento chlupatý pavouk žije v norách pod zemí. Jeho nora vystlaná hedvábnou trubicí má průměr 2 až 4 cm a délku 30 až 60 cm a vchod do nory je často pokryt hedvábnou sítí. Pavouk tráví den schoulený na dně nory, zatímco v noci vystupuje po hedvábné trubičce a ukrývá se poblíž vchodu do nory a čeká na kořist. Poté, co se pavoukovi podaří ulovit oběť, přenese ji do nory. V mnoha případech se na dně nory nacházejí zbytky drobného hmyzu. Vlčí pavouk Lycosa singoriensis je rovněž jedovatý a agresivní pavouk. V roce 2000 bylo hlášeno, že v severní oblasti provincie Sin-ťiang došlo k pokousání lidí a jiných zvířat pavoukem vlčím. Podle klinických záznamů většina kousnutí pavouků způsobila zjevné následky, včetně červených skvrn a bolesti v okolí míst kousnutí (8, 9).

V této studii uvádíme biochemické a farmakologické vlastnosti jedu vlčího pavouka Lycosa singoriensis. Ve srovnání s mnoha jinými dosud studovanými pavoučími jedy má tento pavoučí jed některé odlišné vlastnosti, což z něj činí užitečný zdroj pro screening léčivých látek a pro studium biodiverzity pavoučích jedových peptidů.

MATERIÁLY A METODY

Pavouci a sběr jedu

Dospělé samice pavouka Lycosa singoriensis byly sbírány v provincii Sin-ťiang v Číně, chovány v plastových kbelících, které byly zakryty plastovými sítěmi, a denně dostávaly vodu. Ke krmení byla použita nasekaná vepřová játra a červi. Stejně jako mnoho jiných velkých pavouků (10, 7) se Lycosa singoriensis snadno stává agresivní, když ji vyprovokuje kus plastové trubky. Pevně uchopí hadičku a pak její jedové kly prorazí hadičku a vstříknou dovnitř jed. Tím se vyhne nutnosti elektrické stimulace, která může jed kontaminovat enzymy ze slin i trávicích tekutin. Použitím této metody by bylo možné získat přibližně 50 mg jedu z přibližně 300 pavouků Lycosa singoriensis, což by umožnilo zkoumat biochemické a farmakologické vlastnosti jedu tohoto pavouka. Surový jed je čirá a bezbarvá kapalina, snadno rozpustná ve vodě, která byla sbírána každé dva týdny. Lyofilizovaný surový jed byl před analýzou uchováván při -20 °C.

SDS-PAGE analýza surového jedu

Polyakrylamidová gelová elektroforéza (SDS-PAGE) nasbíraného jedu byla provedena za denaturovaných podmínek v 10% polyakrylamidovém deskovém gelu. Pro elektroforézu bylo použito sto mikrogramů lyofilizovaného jedu a separované proteiny v gelu byly vizualizovány barvením G250.

MALDI-TOF analýza surového jedu

Otisk surového jedu byl stanoven pomocí matricově asistované laserové desorpce/ionizace v čase letu (MALDI-TOF) hmotnostní spektrometrie (pracovní stanice Voyager-DE STR Biospectometry®, Applied Biosystems, USA). Ionizace bylo dosaženo ozářením dusíkovým laserem (337 nm) při urychlovacím napětí 20 kV; jako matrice byla použita kyselina α-kyano-4-hydroxy-cinnamová (CCA).

Účinek surového jedu na izolované preparáty nervových synapsí

K výzkumu farmakologické aktivity surového jedu byly použity tři typy izolovaných preparátů nervových synapsí – myší frenický nerv-diafragma, potkaní vas deferens a srdce ropuchy. Pokusy s preparáty myšího frenického nervu a bránice byly provedeny podle Bülbringa (11). Testy s chámovody a srdcem ropuchy byly provedeny podle Lianga a spol. (12).

Hemolytický test

Hemolytická aktivita surového jedu byla testována s heparinizovanými lidskými červenými krvinkami třikrát propláchnutými v 5 ml fosfátového pufru (PBS – 50 mM NaH2PO4 a 150 mM NaCl, pH 7,2) a centrifugovanými po dobu 5 minut při 3 000 otáčkách za minutu. Červené krvinky byly poté inkubovány při pokojové teplotě po dobu 1 hodiny v deionizované vodě (pozitivní kontrola), v PBS (slepý pokus) nebo s jedy v různých koncentracích (3,1 až 20 mg/ml) v PBS. Vzorky byly odstředěny při 12 000 otáčkách za minutu po dobu 5 minut. Supernatant byl oddělen od peletu a jeho absorbance byla měřena při vlnové délce 570 nm.

Antimikrobiální aktivita surových jedů

Šest bakterií (Bacillus cereus, Corynebacterium glutamicum, Bacillus subtilis, Micrococcus luteus, Staphylococcus albus a E. coli DH5) a dvě houby (Saccaromyces cerevisae a Candida albicans) byly pěstovány v kultivačním médiu, dokud nedosáhly exponenciální fáze s absorbancí při 600 nm 0,3 až 0,8. Padesát mikrolitrů média bylo rovnoměrně rozetřeno na tři ztuhlé agarové plotny. Destičky byly doplněny 1,5% agarosou/mediem nalitým do sterilních Petriho misek 100 × 20 mm. Destičky byly zakryty filtračním papírem o průměru 6 mm. Na filtrační papír bylo umístěno pět mikrolitrů roztoku jedu ve fyziologickém roztoku o různých koncentracích. Po inkubaci při 37 °C přes noc byly účinky surového jedu zaznamenány jako jasné kruhy v bakteriálním trávníku na filtračním papíře.

Při této biologické zkoušce byly tedy roztoky surového jedu o různých koncentracích (3 mg/ml, 6 mg/ml a 12 mg/ml) nakapány na filtrační papír a na papíře byl zjistitelný jasný kruh, pokud jed v této koncentraci inhiboval růst mikrobů.

VÝSLEDKY A DISKUSE

Biochemická charakteristika surového jedu

Zjistilo se, že každý miligram surového jedu obsahuje přibližně 0,659 mg bílkovin/peptidů. Jak je zobrazeno na obrázku 2, vysokomolekulární bílkoviny surového jedu jsou rozloženy převážně mezi molekulovými hmotnostmi v rozmezí od 14 do 31 000 Da, přičemž silný bílkovinný pás je blízko 20 000 Da a další pás je patrný blízko 14 000 Da. Silný pás je patrný také v horní části panelu SDS-PAGE gelu, který tvoří peptidy s molekulovou hmotností nižší než 10 000 Da. Proteiny/peptidy rozložené ve dvou tlustých vazbách jsou nejhojnějšími složkami surového jedu, které odpovídají 80 % proteinové složky surového jedu.

Nedávno byla k objasnění složitosti peptidů jedu použita hmotnostní spektrometrie MALDI-TOF. Navíc s rychlým rozvojem hmotnostní spektrometrie byla tato technologie široce využívána při výzkumu jedů (5, 13). Například Pierre Escoubas et al. (5) vykreslili obraz jedu pro koncepci složitosti jedů australských pavouků nálevníků pomocí kombinovaného cDNA a hmotnostně spektrometrického přístupu. Jejich studie ukazují, že jedy těchto pavouků obsahují mnoho set peptidů, které mají bimodální rozložení, přičemž většina peptidů se nachází v hmotnostním rozmezí 3 000 až 5 000 Da a druhá méně výrazná skupina v rozmezí 6 500 až 8 500 Da. Toto rozložení molekulových hmotností je analogické tomu, které bylo dříve pozorováno u velkého počtu jedů tarantule (4). Podobné výsledky byly zjištěny také v našich předchozích studiích jedů čínských tarantulových pavouků Ornithoctonus huwena, Ornithoctonus hainana a Chilobrachys jingzhao (14-16).

Jak je uvedeno na obrázku 3, spektrometrická analýza MALDI-TOF surového jedu Lycosa singoriensis ukazuje, že rozložení molekulových hmotností je analogicky pozorováno v rozmezí 1 000 až 10 000 Da. Na rozdíl od výše uvedených druhů však lze peptidy jedu Lycosa singoriensis rozdělit podle hmotnosti do tří skupin. První skupinu tvoří peptidy, které mají molekulovou hmotnost mezi 2 000 a 2 500 Da, což znamená, že mají přibližně 20 aminokyselinových zbytků. Toto rozmezí molekulových hmotností bylo u většiny dosud studovaných pavoučích jedů pozorováno jen zřídka. Druhá skupina zahrnuje především peptidy s molekulovými hmotnostmi v rozmezí 4 800 až 5 500 Da, což naznačuje, že se skládají z přibližně 50 aminokyselinových zbytků. Třetí skupinu tvoří peptidy s hmotnostním rozmezím 7 000 až 8 000 Da, což odpovídá více než 60 aminokyselinovým zbytkům. Odhaduje se, že peptidy rozdělené do posledních dvou skupin tvoří většinu jedových peptidů.

Zajímavé je, že poměrně málo peptidů má molekulovou hmotnost mezi 3 000 a 5 000 Da. Paradoxně jsou peptidy v tomto hmotnostním rozmezí nejhojnější složkou v mnoha jiných pavoučích jedech. K objasnění těchto rozporů by bylo zapotřebí dalších studií, které by mohly přispět k pochopení evolučního mechanismu vzniku peptidů pavoučích jedů. Současná studie přispívá k prokázání, že peptidy Lycosa singoriensis jsou velmi rozmanité.

Analýza knihoven cDNA jedových žláz poskytla více než 200 sekvencí peptidů podobných toxinům. Hmotnostní rozložení těchto peptidů odvozených ze sekvencí cDNA je v souladu s rozložením pozorovaným pomocí MALDI-TOF spektrometrie. Analýza sekvencí navíc odhalila, že peptidy z první skupiny nemají žádné cysteinové zbytky a ty z druhé skupiny obsahují 4 nebo 5 disulfidických vazeb, zatímco peptidy z poslední skupiny mají více než 5 disulfidických vazeb (nepublikované údaje). Většina dosud identifikovaných pavoučích peptidových toxinů má obvykle 3 nebo 4 disulfidové vazby a jejich 3D struktury přejímají klasický inhibiční motiv cystinového uzlu. Proto je důvod se domnívat, že některé peptidy z jedu Lycosa singoriensis budou mít nový strukturní motiv.

Farmakologická charakterizace surového jedu

Surový jed ve vysoké dávce 200 µg/ml nedokázal blokovat elektricky stimulovanou kontrakci preparátu bránice frenického nervu myší (n = 5). Vykazoval také nízký účinek na záškubovou odpověď potkaního chámovodu. Koncentrace 200 µg/ml surového jedu mohla pouze částečně inhibovat záškubovou odpověď po dobu 20 minut (n = 5) (obr. 4 – A). Naproti tomu surový jed pavouka O. huwena ve stejné koncentraci dokázal rychle zablokovat záškubovou odpověď stejného preparátu nervové bránice nebo potkaního vas deferens (údaje nejsou uvedeny). Surový jed Lycosa singoriensis však měl významný účinek na kontrakci srdce ropušnice. V přítomnosti 100 µg/ml surového jedu se silně zvýšila rychlost a velikost srdečního rytmu (n = 5) (obr. 4 – B). To naznačuje, že surový jed obsahuje některé sloučeniny, které jsou kardiotonické.

V současné době se kardiotonické látky dělí do tří tříd na základě jejich subcelulárních mechanismů účinku, a to na látky působící prostřednictvím předcházejících mechanismů (Ca2+ mobilizátory), jakož i centrálních a následných mechanismů (Ca2+ senzitizátory). Tyto látky vyvolávají pozitivně inotropní účinek zvýšením intracelulární koncentrace Ca2+ iontů (17). Dosud neexistuje žádná zpráva o kardiotonickém účinku jedů vlčích pavouků, přičemž z těchto jedů nebyly dosud purifikovány a charakterizovány žádné kardiotonické sloučeniny. Proto je důležité zkoumat kardiotonické sloučeniny z jedu Lycosa singoriensis.

Hemolytická aktivita surového jedu byla stanovena pomocí čerstvých lidských erytrocytů. Jak ukazuje obrázek 5 (A), surový jed narušoval lidské erytrocyty v závislosti na dávce. Jeho efektivní hodnota 50% inhibice (EC50) je 1,25 mg/ml.

Jak uvádí Budnik et al. (18), surový jed Lycosa singoriensis obsahuje antimikrobiální peptidy (označované jako lykocitiny 1, 2 a 3), které mohou inhibovat růst grampozitivních a gramnegativních bakterií a hub v mikromolárních koncentracích. Testovali jsme proto antimikrobiální aktivitu surového jedu proti prokaryotickým i eukaryotickým buňkám pomocí testu inhibice růstu na destičkách. V podmínkách našeho biologického testu byly k surovému jedu nejcitlivější buněčné kmeny, konkrétně Bacillus subtilis a Staphylococcus sp, u nichž byl růst silně inhibován při 3 mg/ml. Jed také silně působil proti Corynebacterium glutamicum a Micrococcus luteus, ale slabě proti jednomu z kmenů hub (Candida albicans). Surový jed však neměl žádný zjistitelný účinek na E. coli a Saccaromyces cerevisae ani při vysoké koncentraci 12 mg/ml (Obrázek 5 – B).

V průběhu posledních deseti let bylo z pavoučích jedů identifikováno mnoho antimikrobiálních peptidů. Lykotoxiny I a II byly identifikovány z jedu vlčího pavouka Lycosa carolinensis. Oba jsou lineární antimikrobiální peptidy, které vykazují amfipatický charakter α-helixu typický pro peptidy tvořící póry. Jejich pórotvorný mechanismus byl dále ověřen tím, že podporují vyplavování vápenatých iontů ze synaptosomů (19). Následně po lycotoxinech byly zjištěny antimikrobiální aktivity také u cupienninů (20-22) a oxyopininů (23, 24) z jedu vlčího pavouka Cupiennus salei, respektive Oxyopes kitabensis. Nedávno bylo z jedu pavouka Lachesana tarabaevi purifikováno sedm nových krátkých lineárních antimikrobiálních a cytolytických peptidů zvaných latarciny. Kromě toho bylo z databáze exprimovaných sekvenčních značek pro jedovou žlázu pavouka předpovězeno pět nových peptidů, které mají značnou strukturní podobnost s purifikovanými latarciny (25).

Tyto peptidy z pavoučích jedů patří mezi lineární kationické α-helikální antimikrobiální peptidy. Tato třída antimikrobiálních peptidů má některé společné vlastnosti, jako je inhibice mikrobiálního růstu při nízkých mikromolárních koncentracích a tvorba amfipatických a kationických helikálních útvarů v hydrofobním prostředí. V posledních desetiletích bylo u živočichů i rostlin objeveno velké množství antimikrobiálních peptidů, včetně lineárních kationických α-helikálních antimikrobiálních peptidů. Tyto peptidy se obvykle skládají z 12 až 45 aminokyselin a hrají důležitou roli ve vrozených imunitních systémech většiny živých organismů (26-28). Většina z nich může zabíjet mikroorganismy s následujícími čtyřmi vlastnostmi: selektivní toxicita, rychlé usmrcení, široké antimikrobiální spektrum a žádný rozvoj rezistence (29-31).

V souhrnu uvádíme nové biochemické a farmakologické poznatky o jedu vlčího pavouka Lycosa singoriensis. Odlišné vlastnosti peptidů tohoto jedu z něj činí ideální model pro studium evolučních mechanismů pavoučích jedových peptidů. Farmakologické studium tohoto jedu je užitečné pro purifikaci a charakterizaci bioaktivních peptidů v dalších studiích.

PODĚKOVÁNÍ

Tato práce byla podpořena projekty National Science Foundation (30430170 a 30700127).

1. Corzo G, Escoubas P. Farmakologicky aktivní pavoučí peptidové toxiny. Cell Mol Life Sci. 2003;60(11):2409-26.

2. Escoubas P. Molekulární diverzifikace v pavoučích jedech: síť kombinatorických peptidových knihoven. Mol Divers. 2006;10(4):545-54.

3. King GF. The wonderful world of spiders: preface to the special Toxicon issue on spider venoms (Podivuhodný svět pavouků: předmluva ke zvláštnímu vydání Toxiconu o pavoučích jedech). Toxicon. 2004;43(5):471-5.

4. Escoubas P, Rash L. Tarantulas: eight-legged pharmacists and combinatorial chemists. Toxicon. 2004;43(5):555-74.

5. Escoubas P, Sollod B, King GF. Venom landscapes: mining the complexity of spider venoms via a combined cDNA and mass spectrometric approach. Toxicon. 2006;47(6):650-63.

6. Sollod BL, Wilson D, Zhaxybayeva O, Gogarten JP, Drinkwater R, King GF. Byli pavoukovci první, kdo použil kombinatorické peptidové knihovny? Peptides. 2005;26(1):131-9.

7. Tedford HW, Sollod BL, Maggio F, King GF. Australští pavouci nálevníci: mistři insekticidní chemie. Toxicon. 2004;43(5):601-18.

8. Lu DL, Zhang DF. Dva druhy jedovatých pavouků v Sin-ťiangu a prevence a léčba pavoučího kousnutí. Chin J Zool. 2001;36(5):40-2.

8. Initial observation on living habit of Lycosa singorensis [První pozorování životních zvyklostí pavouka Lycosa singorensis]. Chin J Zool. 2004;39:63-7.

10. Liu Z, Dai J, Dai L, Deng M, Hu Z, Hu W, Liang S. Function and solution structure of huwentoxin-X, a specific blocker of N-type calcium channels, from the Chinese bird spider Ornithoctonus huwena. J Biol Chem. 2006;281(13):8628-35.

11. Bulbring E. Pozorování izolovaného preparátu bránice frenického nervu potkana. Br J Pharmacol Chemother. 1946;1(1):38-61.

12. Liang SP, Chen XD, Shu Q, Zhang Y, Peng K. The presynaptic activity of huwentoxin-I, a neurotoxin from the venom of the Chinese bird spider Selenocosmia huwena. Toxicon. 2000;38(9):1237-46.

13. Guette C, Legros C, Tournois G,Goyffon M, Célérier ML. Peptide profiling by matrix-assisted laser desorption/ionisation time-of-flight mass spectrometry of the Lasiodora parahybana tarantula venom gland. Toxicon. 2006;47(6):640-9.

14. Liang S. Přehled peptidových toxinů z jedu čínského ptačího pavouka Selenocosmia huwena Wang . Toxicon. 2004;43(5):575-85.

15. Liao Z, Cao J, Li S, Yan X, Hu W, He Q, Chen J, Tang J, Xie J, Liang S. Proteomic and peptidomic analysis of the venom from Chinese tarantula Chilobrachys jingzhao. Proteomics. 2007;7(11):1892-907.

16. Yuan C, Jin Q, Tang X, Hu W, Cao R, Yang S, Xiong J, Xie C, Xie J, Liang S. Proteomic and peptidomic characterization of the venom from the Chinese bird spider, Ornithoctonus huwena Wang. J Proteome Res. 2007;6(7):2792-801.

17. Endoh M. Agonista Na+ kanálů: potenciální kardiotonikum s novým mechanismem? Br J Pharmacol. 2004;143(6):663-5.

18. Budnik BA, Olsen JV, Egorov TA, Anisimova VE, Galkina TG, Musolyamov AK, Grishin EV, Zubarev RA. De novo sekvenování antimikrobiálních peptidů izolovaných z jedových žláz vlčího pavouka Lycosa singoriensis. J Mass Spectrom. 2004;39(2):193-201.

19. Yan L, Adams ME. Lycotoxiny, antimikrobiální peptidy z jedu vlčího pavouka Lycosa carolinensis. J Biol Chem. 1998;273(4):2059-66.

20. Kuhn-Nentwig L, Dathe M, Walz A, Schaller J, Nentwig W. Cupiennin 1d: cytolytická aktivita závisí na hydrofobním N-konci a je modulována polárním C-koncem. FEBS Lett. 2002;527(1-3):193-8.

21. Kuhn-Nentwig L, Muller J, Schaller J, Walz A, Dathe M, Nentwig W. Cupiennin 1, nová rodina vysoce bazických antimikrobiálních peptidů v jedu pavouka Cupiennius salei (Ctenidae). J Biol Chem. 2002;277(13):11208-16.

22. Pukala TL, Doyle JR, Llewellyn LE, Kuhn-Nentwig L, Apponyi MA, Separovic F, Bowie JH. Cupiennin 1a, antimikrobiální peptid z jedu neotropického bludného pavouka Cupiennius salei, rovněž inhibuje tvorbu oxidu dusnatého neuronální syntázou oxidu dusnatého. FEBS J. 2007;274(7):1778-84.

23. Corzo G, Villegas E, Gomez-Lagunas F, Possani LD, Belokoneva OS, Nakajima T. Oxyopinins, large amphipathic peptides isolated from the venom of the wolf spider Oxyopes kitabensis with cytolytic properties and positive insecticidal cooperativity with spider neurotoxins. J Biol Chem. 2002;277(26):23627-37.

24. Nomura K, Corzo G. Vliv vazby antimikrobiálních peptidů odvozených od pavouků, oxyopininů, na lipidové membrány. Biochim Biophys Acta. 2006;1758(9):1475-82.

25. Kozlov SA, Vassilevski AA, Feofanov AV, Surovoy AY, Karpunin DV, Grishin EV. Latarciny, antimikrobiální a cytolytické peptidy z jedu pavouka Lachesana tarabaevi (Zodariidae), které jsou příkladem biomolekulární diverzity. J Biol Chem. 2006;281(30):20983-92.

26. Brogden KA. Antimikrobiální peptidy: pórotvorné látky nebo metabolické inhibitory u bakterií? Nat Rev Microbiol. 2005;3(3):238-50.

27. Brown KL, Hancock RE. Kationtové obranné (antimikrobiální) peptidy hostitele. Curr Opin Immunol. 2006;18(1):24-30.

28. Zasloff M. Antimikrobiální peptidy mnohobuněčných organismů. Nature. 2002;415(6870):389-95.

29. Matsuzaki K. Proč a jak jsou peptid-lipidové interakce využívány k sebeobraně? Magaininy a tachyplesiny jako archetypy. Biochim Biophys Acta. 1999;1462(1-2):1-10.

30. Mcphee JB, Hancock RE. Funkce a terapeutický potenciál obranných peptidů hostitele. J Pept Sci. 2005;11(11):677-87.

31. Mookherjee N, Hancock RE. Cationic host defence peptides: innate immune regulatory peptides as a novel approach for treating infections (Kationické peptidy obrany hostitele: regulační peptidy vrozené imunity jako nový přístup k léčbě infekcí). Cell Mol Life Sci. 2007;64(7-8):922-33.

Korespondence:

:
Songpiing Liang
College of Life Sciences, Hunan Normal University
Changsha, Hunan, 410081, Čína.
Tel: +86 731 8872556. Fax: +86 731 8861304.
Email: [email protected].