Descriere generală

Particulele lentivirale dCas9-VP64 gata de utilizare permit transducția imediată a unei game largi de linii celulare. Particulele lentivirale dCas9-VP64 integrează în mod eficient și stabil dCas9-VP64 și caseta de rezistență la blasticidină legată de o peptidă 2A și condusă de promotorul EF1 alfa (EF1a-dCas9-VP64-2A-Blasticidină) pentru o expresie puternică atât în liniile celulare care se divid, cât și în cele care nu se divid. Acestea sunt ideale pentru evitarea procesului anevoios de producere a lentivirusurilor și reprezintă o parte a unui sistem CRISPR în trei părți cu dCas9-VP64 individual. MS2-p65-HSF1 și vectori de expresie gRNA.
Pentru a comanda gRNA în orice format, faceți clic aici

Aplicație

Validare funcțională genomică/țintă
– Screening genetic înainte imparțial
– Activare transcripțională puternică în mai multe linii celulare
– Crearea de linii celulare care exprimă în mod stabil dCas9-VP64.

Caracteristici și beneficii

– Foarte specifice și foarte active
– Particule lentivirale de înaltă puritate și titru ridicat verificate prin secvență
– Activează genele prin activare transcripțională mai degrabă decât prin supraexprimare bazată pe ADNc
Aflați mai multe despre activatorii SAM CRISPR la SigmaAldrich.com/CRISPRa

Principiu

Sistemele CRISPR/Cas sunt utilizate de bacterii și archaea ca mijloc de apărare împotriva virușilor și plasmidelor invadatoare. Recent, sistemul CRISPR/Cas de tip II de la bacteria Streptococcus pyogenes a fost modificat pentru a funcționa în sisteme eucariote folosind două componente moleculare: o singură proteină Cas9 și un ARN ghid necodificator (ARNg). Endonucleaza Cas9 poate fi făcută inactivă (dCas9) prin mutații în cele două domenii proteice, RuvC și HnH (D10A și, respectiv, H840A), care sunt responsabile de activitatea nucleazei. Proteina deficientă de nuclează poate fi apoi fuzionată cu activatorul transcripțional VP64 și utilizată împreună cu un ARN ghid modificat cu aptameri de ARN MS2 care au rolul de a recruta coactivatorii transcripționali suplimentari p65 și HSF1. Complexul SAM asamblat este apoi utilizat ca un sistem de livrare a încărcăturii către promotorii de gene țintă, permițând activarea transcripțională specifică locului genei de interes.

Definiția unității

VP/mL este unitatea de măsură a concentrației pentru titrul viral estimat prin testul p24.