As benzodiazepinas são comumente vistas em amostras submetidas a testes de drogas de pacientes, pessoas envolvidas em casos de bem-estar infantil, testes de drogas no local de trabalho, bem como em agressões com drogas facilitadas. Existem poucos estudos experimentais anteriores sobre a excreção de benzodiazepinas na urina e no líquido bucal. O objetivo deste estudo foi investigar as concentrações de diazepam e alprazolam no líquido oral e na urina por até 2 semanas após a ingestão de uma única dose oral em voluntários saudáveis. Um total de 11 voluntários saudáveis ingeriram 10 mg de diazepam no início do estudo e 0,5 mg de alprazolam no terceiro dia do estudo. Um total de 10 amostras de líquido oral e 17 amostras de urina foram coletadas de cada participante. As amostras foram analisadas por cromatografia líquida com espectroscopia de massa em tandem e métodos de espectrometria de massa em tandem por cromatografia líquida de ultra-alto desempenho. O tempo médio de detecção foi de 252 h para o metabolito de diazepam mais longo detectado na urina (oxazepam, intervalo 203-322) e 132 h em líquido oral (N-desmetildiazepam, intervalo 109-136). Para o alprazolam, o tempo médio de detecção foi de 36 h (metabolito α-OH-alprazolam, intervalo 26-61) na urina e 26 h (alprazolam, intervalo 4-37) no fluído oral. Estes resultados mostram que os tempos de detecção são de apenas 36 h para o alprazolam na urina após a ingestão de uma única dose oral terapêutica. Para o diazepam na urina, os tempos de detecção foram de 11 dias. Os tempos de detecção foram geralmente mais curtos no líquido oral em comparação com a urina. Os resultados podem ser úteis na interpretação dos achados de diazepam ou alprazolam em casos de teste de drogas envolvendo urina ou líquido oral.