General description

Ready to use dCas9-VP64 lentiviral particles enable immediate transduction of a wide range of cell lines. As partículas lentivíricas dCas9-VP64 integram de forma eficiente e estável o dCas9-VP64 e o cassete de resistência à blasticidina ligado por um peptídeo 2A e impulsionado pelo promotor alfa EF1 (EF1a-dCas9-VP64-2A-Blasticidina) para uma forte expressão tanto em linhas celulares divididas como não divididas. São ideais para evitar o tedioso processo de produção de lentivírus e são uma parte de um sistema CRISPR de três partes com dCas9-VP64 individual. MS2-p65-HSF1 e vetores de expressão gRNA.
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Aplicação

Validação Funcional Genômica/Alvo
– Triagem genética avançada imparcial
– Forte ativação transcripcional em múltiplas linhas de células
– Criação de linhas de células expressando de forma estável o dCas9-VP64.

Características e benefícios

– Altamente específico e altamente ativo
– Sequência verificada de partículas lentivíricas de alta pureza e alto título
– Ativa genes através de ativação transcripcional ao invés de sobreexpressão baseada em cDNA
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Princípio

Os sistemas CRISPR/Cas são empregados por bactérias e arquebactérias como defesa contra vírus invasores e plasmídeos. Recentemente, o sistema CRISPR/Cas tipo II da bactéria Streptococcus pyogenes foi projetado para funcionar em sistemas eucarióticos usando dois componentes moleculares: uma única proteína Cas9 e um RNA guia não codificador (gRNA). A endonuclease Cas9 pode ser tornada inativa (dCas9) com mutações para os dois domínios proteicos, RuvC e HnH (D10A e H840A respectivamente), que são responsáveis pela atividade nuclease. A proteína deficiente em nuclease pode então ser fundida com o ativador transcripcional VP64 e usada em conjunto com um RNA guia modificado com aptamers de RNA MS2 que funcionam para recrutar os coativadores transcripcionais adicionais p65 e HSF1. O complexo SAM montado é então usado como um sistema de entrega de carga para direcionar os promotores genéticos, permitindo a ativação transcripcional do gene de interesse específico do local.

Definição da unidade

VP/mL é a unidade de medida de concentração para o título viral estimado pelo ensaio p24.