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Caracterização molecular de xynX , um gene que codifica uma xilanase multidomínio com domínio termostabilizador de Clostridium thermocellum

Um gene Clostridium thermocellum, xynX, codificação para uma xilanase foi clonado e a sequência completa de nucleotídeos foi determinada. O gene xilanase do Clostridium thermocellum consiste em um ORF de 3261 nucleotídeos codificando uma xilanase (XynX) de 1087 resíduos de aminoácidos (116 kDa). A análise sequencial da XynX mostrou uma estrutura multidomínio que consistia em quatro domínios diferentes: um domínio termostabilizador N-terminal homólogo a sequências encontradas em várias enzimas termofílicas, um domínio catalítico homólogo a 10 glicosil hidrolases da família, um domínio de ligação celular (CDB) duplicado homólogo a CDB da família IX e um domínio homólogo triplicado de camada S. Um mutante de exclusão do xynX tendo apenas a região catalítica produziu uma enzima mutante XynX-C que reteve a atividade catalítica mas perdeu a termoestabilidade. Em termos de semi-vida a 70 °C, a termoestabilidade do XynX-C foi cerca de seis vezes inferior à da outra enzima mutante, XynX-TC, produzida por um mutante contendo tanto o domínio termostabilizador como o domínio catalítico. A temperatura ótima do XynX-C era cerca de 5-10 °C mais baixa que a do XynX-TC.