TY – JOUR

T1 – Base estrutural da ligação do substrato em WsaF, uma ramnosiltransferase de Geobacillus stearothermophilus

AU – Steiner, Kerstin

AU – Hageluken, Gregor

AU – Messner, Paul

AU – Schaeffer, Christina

AU – Naismith, James Henderson

PY – 2010/3/26

Y1 – 2010/3/26

N2 – Os polímeros de hidratos de carbono são medicamente e industrialmente importantes. A camada S de muitos organismos Gram-positivos compreende polímeros de proteínas e carboidratos e forma uma matriz quase paracristalina na superfície celular. Esta matriz não só é importante para as bactérias, mas tem também potencial aplicação na fabricação de polissacarídeos e glicoconjugados comercialmente importantes. A camada S de glicoproteína glicociana de Geobacillus stearothermophilus NRS 2004/3a é composta principalmente de unidades de repetição de três açúcares ramnose ligados por ligações alfa-1,3-, alfa-1,2-, e beta-1,2. A formação do beta-1,2-linkage é catalisada pela enzima WsaF. O uso racional deste sistema é dificultado pelo fato de que a WsaF e outras enzimas no caminho compartilham muito pouca homologia a outras enzimas. Nós relatamos a caracterização estrutural e bioquímica da WsaF, a primeira ramnosiltransferase deste tipo a ser caracterizada. O trabalho estrutural foi auxiliado pelo método de redução da entropia superficial. A enzima tem dois domínios, o domínio N-terminal, que liga o aceitador (a cadeia crescente de ramnan), e o domínio C-terminal, que liga o substrato (dTDP-beta-L-rhamnose). A estrutura da WsaF ligada ao dTDP e dTDP-beta-L-rhamnose acoplada à análise bioquímica identifica os resíduos subjacentes à catálise e ao reconhecimento do substrato. Nós construímos e testamos por mutagênese dirigida ao local um modelo para o reconhecimento do aceitador. (C) 2010 Elsevier Ltd. Todos os direitos reservados.

AB – Os polímeros de carboidratos são importantes do ponto de vista médico e industrial. A camada S de muitos organismos Gram-positivos compreende polímeros de proteínas e carboidratos e forma uma matriz quase paracristalina na superfície celular. Esta matriz não só é importante para as bactérias, mas tem também potencial aplicação na fabricação de polissacarídeos e glicoconjugados comercialmente importantes. A camada S de glicoproteína glicociana de Geobacillus stearothermophilus NRS 2004/3a é composta principalmente de unidades de repetição de três açúcares ramnose ligados por ligações alfa-1,3-, alfa-1,2-, e beta-1,2. A formação do beta-1,2-linkage é catalisada pela enzima WsaF. O uso racional deste sistema é dificultado pelo fato de que a WsaF e outras enzimas no caminho compartilham muito pouca homologia a outras enzimas. Nós relatamos a caracterização estrutural e bioquímica da WsaF, a primeira ramnosiltransferase deste tipo a ser caracterizada. O trabalho estrutural foi auxiliado pelo método de redução da entropia superficial. A enzima tem dois domínios, o domínio N-terminal, que liga o aceitador (a cadeia crescente de ramnan), e o domínio C-terminal, que liga o substrato (dTDP-beta-L-rhamnose). A estrutura da WsaF ligada ao dTDP e dTDP-beta-L-rhamnose acoplada à análise bioquímica identifica os resíduos subjacentes à catálise e ao reconhecimento do substrato. Nós construímos e testamos por mutagênese dirigida ao local um modelo para o reconhecimento do aceitador. (C) 2010 Elsevier Ltd. Todos os direitos reservados.

KW – Estrutura cristalina

KW – Geobacillus stearothermophilus

KW – Rhamnosyltransferase

KW – Glicosilação da proteína da camada S

KW – Biossíntese de Glicoproteína Glicano

KW – Manosyltreansferase pima

KW – Glycogen-Synthase

KW – Difraction data

KW – Gene-cluster

KW – Família GT4

KW – Glycosyltransferases

KW – Catalysis

KW – Sequence

UR – http://www.scopus.com/inward/record.url?scp=77349090654&partnerID=8YFLogxK