Articles

Moleculaire karakterisering van xynX, een gen dat codeert voor een multidomein xylanase met een thermostabiliserend domein van Clostridium thermocellum

Een gen van Clostridium thermocellum, xynX, dat codeert voor een xylanase, werd gekloond en de volledige nucleotidenvolgorde werd bepaald. Het xylanase-gen van Clostridium thermocellum bestaat uit een ORF van 3261 nucleotide die codeert voor een xylanase (XynX) van 1087 aminozuurresiduen (116 kDa). Sequentieanalyse van XynX toonde een multidomeinstructuur die bestond uit vier verschillende domeinen: een N-terminaal thermostabiliserend domein dat homoloog is met sequenties gevonden in verscheidene thermofiele enzymen, een katalytisch domein dat homoloog is met familie 10 glycosylhydrolases, een gedupliceerd cellulose-bindend domein (CBD) dat homoloog is met familie IX CBD’s, en een drievoudig S-laag homoloog domein. Een deletiemutant van xynX met alleen het katalytische gebied leverde een mutant enzym XynX-C op dat zijn katalytische activiteit behield maar niet meer thermostabiel was. Uitgedrukt in halfwaardetijd bij 70 °C was de thermostabiliteit van XynX-C ongeveer zes maal lager dan die van het andere mutant-enzym, XynX-TC, dat werd geproduceerd door een mutant die zowel het thermostabiliserende domein als het katalytische domein bevatte. De optimale temperatuur van XynX-C was ongeveer 5-10 °C lager dan die van XynX-TC.