General description

Ready to use dCas9-VP64 lentiviral particles enable immediate transduction of the wide range of cell lines.All rights reserved. 2Aペプチドを連結したdCas9-VP64とblasticidin耐性カセットをEF1αプロモーターにより効率的かつ安定的に組み込み、分裂中および非分裂中の細胞株で強力に発現させます（EF1a-dCas9-VP64-2A-BLasticidin)。 これらは、面倒なレンチウイルスの製造プロセスを避けるために理想的であり、個々のdCas9-VP64と3つのCRISPRシステムの1部である。 MS2-p65-HSF1およびgRNA発現ベクターが含まれます。
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Application

Functional Genomics/Target Validation
– Unbiased forward genetic screening
– 複数の細胞株で強い転写活性化- dCas9-VP64 を安定して発現する細胞株の作製
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特徴と利点

– 高い特異性と高い活性
– 配列検証済みの高純度、高力価のレンチウイルス粒子
– cDNAベースの過剰発現ではなく、転写活性化による遺伝子の活性化 SAM CRISPR Activatorについての詳細は、SigmaAldrichでご覧いただけます。com/CRISPRa

原理

CRISPR/Casシステムは、侵入したウイルスやプラスミドに対する防御として、バクテリアや古細菌によって採用されています。 近年、細菌Streptococcus pyogenesのII型CRISPR/Casシステムは、単一のCas9タンパク質と非コードガイドRNA（gRNA）という2つの分子構成要素を用いて真核生物系で機能するように工学的に設計された。 Cas9エンドヌクレアーゼは、ヌクレアーゼ活性を担う2つのタンパク質ドメイン、RuvCとHnH（それぞれD10AとH840A）への変異により、不活性化（dCas9）することが可能である。 このヌクレアーゼ欠損タンパク質は、転写活性化因子VP64と融合し、さらに転写共活性化因子p65とHSF1をリクルートする機能を持つMS2 RNA aptamerで修飾したガイドRNAと共に使用することが可能である。 このSAM複合体は、標的遺伝子プロモーターへのカーゴデリバリーシステムとして使用され、目的の遺伝子の部位特異的な転写活性化を可能にする。

Unit Definition

VP/mLは、p24アッセイによって推定されるウイルス力価の濃度単位です。