Abstract

キサントンは天然物化学において最も大きな化合物のクラスの1つである。 高等植物、菌類、シダ類、地衣類などの天然物から数多くのキサントンが単離されてきた。 キサントン類は薬効があるため、徐々に重要性を増してきた。 本総説では、これまでに単離された天然物キサントンの種類、単離、特性評価、生物学的応用、生合成に焦点を当てる。 キサントン類の単離と構造解明には、液-固、液-液抽出、TLC、フラッシュクロマトグラフィー、カラムクロマトグラフィー、IR、1H NMR、13C NMR分光法、GLC、HPLC、GC、LCMSなどの物理化学的、機器的方法が広く用いられてきた。 肝保護、抗発癌、抗ハンセン病、抗マラリア、抗酸化、抗コリン、変異原性、放射線防護、免疫調節、抗骨吸収、抗寄生虫、ノイラミニダーゼ阻害、抗補体、抗菌、抗真菌、殺藻、抗HIV、心臓保護。 天然キサントンには、抗腫瘍、抗糖尿病、抗高脂血症、抗動脈硬化、抗炎症、抗潰瘍、抗糖尿病、低脂血症、鎮痛、抗喘息、抗ヒスタミン、抗アメーバ、利尿、止瀉、殺幼虫、殺卵作用が報告されている。 本総説は、新薬の研究開発に必要な基礎知識を提供するものである。 はじめに

キサントンは、高等植物科、菌類、地衣類に共通して存在する二次代謝産物である。 キサントンの薬理作用は非常に注目されています。 キサントン類はフラボノイド類と構造が似ており、クロマトグラフィーでの挙動も似ています。 フラボノイドは自然界に多く存在しますが、キサントンは限られた科にしか存在しません。 キサントンはリンドウ科、オトギリソウ科、クワ科、ポリガラリー科に必ず存在する。 キサントン類はポリヒドロキシル化した親化合物として見出されることもあるが、多くはモノまたはポリメチルエーテルであり、配糖体として見出される。 イリドイドとは異なり、キサントンはリンドウ科のすべての植物種に存在するわけではないようである。 このことは、Hostettmannらの系統的研究によって証明されている。 高等植物に12種、菌類に4種のキサントンが存在することは、1961年にRobertsが、1963年にDeanが報告している。 Gottliebは高等植物から60種、菌類から7種のキサントンを単離し、Carpenterらは高等植物から82種のキサントンを単離したとしている。 Gunasekeraは5科の気管支植物から183種のキサントンを記録している。 Vieira と Kijjoa は、515 種類のキサントンのうち、278 種類が天然由来であると報告している。 これらのキサントンは、20科の高等植物（44属122種）、菌類（19種）、地衣類（3種）から単離されたものである。 この時期、高等植物からのキサントンは、主にクンシラン科（12属55種）とリンドウ科（8属28種）に関連していると思われる。 BoとLiuは、薬理学的に活性なキサントンの分離方法についてレビューしている。 Jose Pedraza-Chaverri らは、C. Garcinia (mangostana) の分離された化学成分および薬効について概説している。 キサントンを含む植物、シダ類、菌類には、Artocarpus, Anthocleista, Allanblackia, Andrographis, Aspergillus, Bersama, Blackstonia, Calophyllum, Canscora, Centaurium, Chironia, Cratoxylum, Comastoma, Garcinia, Cudrania, Eustoma, Emericella, Frasera, Garcinia, Gentianaがある。 Gentianella, Gentianopsis, Halenia, Hoppea, Hypericum, Ixanthus, Lomatogonium, Mesua, Morinda, Macrocarpaea, Mangrove fungi, Orphium, Peperomia, Pentadesma, Polygala, Penicillium, Phoma, Phomopsis, Rheedia, Rhus, Securidaca, Symphonia, Schultesia, Swertia, Tripterospermum, Vismia, VeratrillaそしてXylariaのこと。

2 分類

天然物から単離されたキサントンは、単純キサントン、キサントン配糖体、プレニル化キサントン、キサントンリグノイド、ビスキサントン、雑キサントンの6グループに大別される。

2.1. 単純酸素化キサントン

単純酸素化キサントンは、酸素化の程度により、非酸素化、モノ-、ジ-、トリ-、テトラ-、ペンタ-およびヘキサ酸素化物質に分類される。 これらのキサントンでは、置換基は単純なヒドロキシ、メトキシ、またはメチル基である。 これまでに約150種の単純酸素化キサントンが報告されている。

2.1.1. 非酸素性単純キサントン

ノルウェー沖の原油から非酸素性キサントン、すなわちメチルキサントン（1-、2-、3-、4-メチルキサントン）が報告された。 これは化石有機物中にキサントン類が含まれていることを示す最初の報告である。 これらのキサントン類は、貯留層中のキサンテン類の酸化による斜行生成物、あるいは芳香族前駆体からの生合成によって生成された可能性がある

2.1.2. 一酸化キサントン

Swertiaの一酸化キサントンはCalophyllum, Kielmeyera, Mesua, Ochrocarpusの4属から2-ヒドロキシキサントン、4-ヒドロキシキサントン、2-メトキシキサントンが分離されています。 2.1.3. 二酸化キサントン

クワ科、トウダイグサ科の植物から15種以上の二酸化キサントンが報告されています。 1,5-ジヒドロキシキサントン、1,7-ジヒドロキシキサントン、2,6-ジヒドロキシキサントンはかなり広範囲に見いだされます。 その他、1-hydroxy-5-methoxyxantone, 1-hydroxy-7-methoxyxantone, 2-hydroxy-1-methoxyxanthone, 3-hydroxy-2-methoxyxanthone, 3-hydroxy-4-methoxyxanthone, 5-hydroxy-1-methoxyxanthone, 1,2-methylenedioxyxanton などのdeoxygenated xanthonesが11属から報告されている

2.1.4. トリオキシキサントン

トリオキシキサントンは45種が報告され、そのうち15種が新規に記載された。 その中で、Hypericum sampsoniiから報告された2つの天然スルホン化キサントン、すなわち1,3-dihydroxy-5-methoxyxanthone-4-sulfonateと5-O-β-D-glucopyranosyl-1,3-dihydroxyxanthone-4-sulfonateだけであった。 これらのスルホン化キサントンは、癌細胞株に対して顕著な細胞毒性を示すことが判明した。 また、9属から1,3,5-, 1,5,6-, 1,6,7-, 2,3,4-trihydroxyxantone, 17種のメチルエーテルと2種のメチルエニオキシ誘導体が報告されている。 テトラオキシキサン類

これまでに同定された53種のテトラオキシキサン類のうち、21種が新規天然物であることが判明した。 これらのキサントンは主にリンドウ科、クルミ科、ポリガラリー科の植物から報告された。 興味深いことに、Polygala vulgarisから単離された7-chloro-1,2,3-trihydroxy-6-methoxyxanthoneは、Polygalaceaeの最初のクロロキサントンと思われた。 この化合物は、ヒト腸管腺癌細胞株に対して抗増殖活性を示した。 遊離型ヒドロキサントンは1,3,5,6-, 1,3,5,7-, 1,3,6,7-tetrahydroxyxanthone .

2.1.6. ペンタオキシゲン化キサントン

27種のペンタオキシゲン化キサントンが確認された。 4つの部分的にメチル化されたペンタオキシゲン化キサントン、すなわち1,8-ジヒドロキシ-2,3,7-トリメトキシキサントン、5,6-ジヒドロキシ-1,3,7-トリメトキシキサントン、1,7-ジヒドロキシ-2,3,8-trimethoxyxantone, 3,8-dihydroxy-1,2,6-trimethoxyxantone , and 3,7-dihydroxy-1,5,6-trimethoxyxantone, は3属から分離されています。

2.1.7. ヘキサオキシキサントン

2種のCentaurium属から8-hydroxy-1,2,3,4,6-pentamethoxyxantoneと1,8-dihydroxy-2,3,4,6-tetramethoxyxantone , 3-hydroxy-1,2,5,6,7-pentamethoxyxanton が Polygala japonicaの根から単離されている。 ペンタオキシゲナーゼ、ヘキサオキシゲナーゼ、ダイマーゼの自然発生については、Peres and Nagemがレビューしている。

2.2. キサントン配糖体

リンドウ科、ポリガラリー科を中心に61種の天然配糖体キサントン（うち39種は新規化合物）がC-またはO-配糖体として報告されています。 ここでは、天然に存在するキサントン配糖体の詳細を概説し、C-配糖体とO-配糖体の区別を行った。 C-グリコシドでは、キサントン核と糖部分がC-C結合で結ばれており、酸性や酵素による加水分解に強いのに対し、O-グリコシドでは典型的なグリコシド結合を有する

2.2.1. C-グリコシド

C-グリコシドは稀であり、Sultanbawaの総説では7種、Al-Hazimiの総説では17種しか言及されていない。 C-グリコシドとしてはマンギフェリンとイソマンギフェリンが代表的である。 マンギフェリン (2,-C-β-D-glucopyranosyl-1,3,6,7-tetrahydroxyxanthone) は被子植物とシダ植物に広く存在し、Mangifera indicaから最初に単離された。 異性体のイソマンギフェリン（4-C-β-D-グルコピラノシル-1,3,6,7-テトラヒドロキシキサントン）は、Anemarrhena asphodeloidesの地上部から単離されたものです。 ホモマンギフェリン (2-C-β-D-glucopyranosyl-3-methoxy-1,6,7-trihydroxyxanthone) はMangifera indicaの樹皮から単離された。 1973年、Canscora decussateからマンギフェリンとは異なる酸化パターンを持つ別のグリコキサントン（2-C-β-D-glucopyranosyl-1,3,5,6-tetrahydroxyxantone）が発見された。 ArisawaとMoritaはIris florentinaから2-C-β-D-glucopyranosyl-5-methoxy-1,3,6-trihydroxyxanthoneのテトラオキシアルキサンテン配糖体を単離した

2.2.2. O-グリコシド

キサントンO-グリコシドは20種以上知られています。 その中には、Gentiana acaulisのgentiacauloside、G. luteaのgentioside、Swertia japonicaのswertianolinなど、天然物由来のものがあります。 これらの天然物は、リンドウ科に限定して存在する。 最初のキサントンO-グリコシドであるノルスウェルチアニン-1-O-グルコシル-3-O-グルコシドは、S. perennisから単離された。 シダ植物からテトラオキシキサンテンO-グリコシド（3,7,8-trihydroxyxanthone-1-O-β-laminaribioside）が単離された. また、GentianaとCanscora decussataから1-Hydroxy-7-methoxy-3-O-primeverosylxanthoneと1-methoxy-5-hydroxyxanthone-3-O-rutinosideが単離されています。 プレニル化キサントン類

プレニル化キサントン類285種のうち、173種が新規化合物として記載された。 プレニル化キサントンの出現はオトギリソウ科の植物に限定される。 置換基の主要なC5ユニットには、イソメリセリンによく見られる3-メチルブト-2-エニルまたはイソプレニル基、ニグロリンキサントンPに見られる3-ヒドロキシ-3-メチルブチルおよびグロブキサントンに見られる1,1-ジメチルプロップ-2-エニルがそれぞれ含まれていた。 また、Calophyllum inophyllumからはプレニル化キサントンであるカロキサントンOとカロキサントンPが、Garcinia oblongifoliaからはポリプレニル化キサントンとベンゾフェノンが単離された

2.4. キサントノリグノイド

天然に存在するキサントノリグノイドは稀であり、5つの化合物しか知られていない。 最初のキサントノリグノイドはCastelão Jr.らによってKielmeyera種から単離された。 彼らはまた、Caraipa densifloraからCadensins AとBと名付けた2つのキサントノリグノイドを単離した。 キサントノリグノイドの一つであるキールコリンはオトギリソウ属から得られた。 最近、Vismia guaramirangae、Kielmeyera variabilis、Hypericum canariensisからkielcorinが、Vismia guaramirangaeとHypericum canariensisからcadensin Cとcadensin Dが報告されている。 ビスキサントン類

これまでに高等植物から5種、地衣類から1種、菌類から6種、合計12種のビスキサントン類が報告されている。 その中にはオトギリソウの地上部からのjacarelhyperols AとB、Symphonia globuliferaの根からのダイマーキサントン、Gobulixantone Eが含まれている。 また、Phomopsis longicollaから3種のC2-C2’ダイマーテトラヒドロキシキサントンdicerandrols A, B, Cが単離されている

2.6. その他

上記以外の置換基を有するキサントン類もこのグループに含まれる。 キサントフルビン、ビナキサントンはPenicillium属から単離された。 Streptomyces属の培養液からHSP47（熱ショックタンパク質）遺伝子発現阻害作用を有する多環式物質（xanthopterin）が単離された。 キサントリプチンは、ヒト皮膚線維芽細胞のTGF-b処理によるコラーゲン産生を強力に抑制することが知られている。 キサントンは様々な方法で合成されてきた。 キサントン類は様々な方法で合成されており、ビルディングブロック、ディールスアルダー反応、不均一系触媒などの合成法の要素についても概説した。

3 キサントン類の単離方法と特性評価

植物キサントン類は、一般にシリカゲル上で極性が増加する異なる混合溶媒を用いてカラムクロマトグラフィーによって単離する。 キサントン配糖体は通常、MeOHから結晶化される。 また、TLCやHPLCを用いて、真正試料との比較により分離・同定することも可能である。 キサントンの構造は、UV、IR、MS、NMRのデータに基づいて確立されています。 分離が困難な場合は、AcOEt, MeOH, H2O (21 : 4 : 3) を移動相とするシリカゲル上の分取TLCが使用されています。 TLCでよく使われる溶媒は、ポリアミドではMeOH-H2O (9 : 1) とMeOH-H2O-AcOH (90 : 5 : 5)、セルロースではHOAc (5-30%) 、シリカゲルでは Py-H2O-AcOEt-MeOH (12 : 10 : 80 : 5) と AcOEt-MeOH-H2O (21 : 4 : 3) 、クロマトプレートは紫外線で観察される。 場合によっては、MeOH中の5%KOHまたは5%H2SO4水溶液を噴霧すると効果的です。 ポリアミドカラムは、キサントン配糖体の分離によく使用される。 また、Sephadex LH20カラムを用いたキサントン類の精製も行われている。

HPLC はキサントンの分離、同定、定量に最も適した方法であることが証明されている。 天然キサントン類のHPLC法は、微多孔質化学結合シリカゲル（Micropak CNカラム）、溶媒ヘキサン-クロロホルム（13 : 7, v/v）, イソオクタン-CHCl3（3 : 17, v/v）, またはジオキサン-ジクロロメタン（1 : 9）により254 nmで紫外線検出器で検出する方法が開発されてきた。 キサントン類の極性アグリコンや配糖体も、アセトニトリル-水を移動相とする逆相カラム（およびC18）で分離される。 また、高速向流クロマトグラフィー（HSCCC）と高速遠心分離クロマトグラフィー（HPCPC）を用いて、Anemarrhena asphodeloides抽出物からマンギフェリンとネオマンギフェリンを、マンゴスチン果皮からα-マンゴスチンとγ-マンゴスチンを分離・単離しました。 紫外線可視分光法（UV）

紫外線可視分光法は、キサントン中の遊離水酸基の位置を特定するのに有効な技術である。 特に3位のOH基はNaOAcの添加により容易に検出され、その結果、300-330nmのバンドがバスクロミックにシフトし、強度が増加した。 220-410nmの領域には常に3〜4本の最大吸収のバンドが見られ、全てのバンドが高い強度を示すことが注目される。 ほとんどの物質が400nmの領域に顕著な吸収を示し、これがその黄色い色の理由である.

3.2. 赤外分光法 (IR)

キサントン中のカルボニル基は、1657cm-1の領域に強いバンド（伸縮周波数）としてIRスペクトルで常に容易に検出されます。 l位または8位に水酸基があると、水素結合により1650cm-1程度まで周波数が下がる。 キサントン核の3位または6位の置換基はカルボニル伸縮周波数に顕著な影響を与える可能性があります。 プロトン核磁気共鳴法（1H NMR）

1次元および2次元NMRスペクトル（1H、13C、DEPT、COSY、TOCSY、HROESY、HSQC、HMBC、NOESY）は、キサントン類の特性解析に使用されている。 1H NMRスペクトルは、TMSの基準信号から0-12 ppmのダウンフィールドの範囲に優位に現れる。 シグナルの積分は、存在するプロトンの数に比例する。 1H NMRは、各環上の置換パターンに関する情報を提供します。 アセチル化誘導体は、グリコシドの構造決定に利用されている。 メトキシ基をアセチル基で置換したときに生じる芳香族プロトンの吸収位置のシフトを観察することによって、アセチル基とメトキシ基の数と相対位置を決定することができる。 2.40-2.50のシグナルはカルボニル基の近位（1位または8位）でアセチル化されていることを示し、その他の位置ではアセチル化シグナルはδ2.30-2.35の間に収まる。 非アセチル化キサントンでは、δ12-13に水素結合したOHが存在することから、1または8に水酸基が置換していることも確認された。 しかし、これらの位置が非置換の場合、芳香族プロトンの吸収はδ7.70-8.05に現れる。 1,3,7,8-および1,3,5,8-は、1H NMRスペクトルで2つのメタおよび2つのオルト結合プロトンを示した。 また、1,3,7,8-系は1,3,5,8-系（ベリディフォリン）よりも低磁場にオルソカップリングプロトンが存在することで区別することが可能であった。 8-C-グルコシルフラボン酢酸の-O-アセチルメチルプロトンのシグナルは対応する6-C-グルコシルフラボン酢酸のそれよりも高磁場に見られる。 同様に2-Cと4-Cの異性体グリコシルキサントンも区別できる。 炭素核磁気共鳴法（13C NMR）

13C NMRスペクトルのシグナルの数は、異なる種類の炭素原子の数を示す。 分子内に存在する炭素原子の総数を知ることができる。 特に2糖類や多糖類の糖鎖の結合を決定するのに有効で、グルコースでは一級アルコールを運ぶ炭素のシグナルがδ62に現れる。 このシグナルは1-6結合を持つ2糖では67にシフトする。 1位と8位が水酸基で置換されている場合、カルボニル炭素の化学シフトは184.5である。 しかし、これらの位置の一方がメトキシ基または糖鎖で占められている場合、カルボニルの信号は約4 ppm上方へシフトする。 また、メトキシ基と糖の両方が存在する場合は、10ppm程度シフトする。 メトキシ基が1位または8位にある場合、対応する吸収はδ60-61に現れるが、メトキシ基がキサントン核の残りの位置にある場合は約56に現れる.

3.5. 質量分析（MS）

質量分析もキサントン配糖体の構造解明に有用な手段である。 Proxはマンギフェリンと関連するC-グリコシドのフラグメンテーションパターンを確立した。 有富と川崎は、同じ化合物や類似化合物の過アセチル化誘導体を用いて、満足のいく結果を得た。 O-配糖体のマススペクトルでは、識別可能な分子イオンピークは認められないが、アグリコン部分に起因する重要なフラグメントイオンピークが出現し、その後さらにフラグメンテーションが進行する。 OH、H2O、CHOの消失による重要なフラグメントイオンは、カルボニル基にメトキシ置換基を持つキサントンおよび関連化合物に典型的に見られる。

4 キサントン類の生物活性

リンドウ科に属する植物はキサントン類による苦味でよく知られており、食欲不振や発熱に対する伝統療法に用いられ、今でも多くの「トニック」製剤に含まれています。 リンドウ科のキサントンやイリドイドには、いくつかの特異的な活性が報告されている。 キサントン類（特にマンギフェリン）には中枢神経刺激作用や抗炎症作用が報告されている。 bellidifolin と swerchirin には、強い血糖降下作用が報告されている。 Swertiaの粗抽出物は、虫除け活性を示すことが報告されている。 Swertia のほとんどの種の抽出物は、変異原性活性を示す. S. paniculataの抽出物は、インド医学のシステムで苦味強壮剤として、いくつかの精神障害の治療に使用されています。 S. hookeri抽出物は、微生物感染症の治療や気分の高揚剤として使用されています。 S. franchetiana から単離された Swertifrancheside は、ヒト免疫不全ウイルス-1逆転写酵素の DNA ポリメラーゼ活性の強力な阻害剤であることが判明した。 天然に存在するキサントンは、その顕著な薬理学的およびその他の生物学的活性の観点から、重要な有機化合物の一群として浮上している。 現在、化学療法剤として使用されている多くの植物製品が、キサントンを活性成分として含んでいることが確認されている。 マンギフェリンは、薬理学的に研究された最初のキサントンであり、幅広い生物学的活性を示すことが判明している。 モノアミン酸化酵素阻害作用、強心作用、痙攣作用、胆汁分泌促進作用がある。 また、顕著な抗炎症作用も認められている。 マンギフェリンを含む経口および局所化合物は、ヘルペスウイルスに起因する疾患の治療に有用である。 マンギフェリンは、高地低酸素からラットの肝臓を保護することが判明しています。 一方、Ghosal と Chaudhuri は、マウスとラットのキサントン-O-グリコシドについて、逆の中枢神経抑制効果を観察しています。 抗マラリア薬AYUSH-64は、成分の一つとしてS. chirataを含んでいる。 S. chirataのキサントンは中枢神経抑制作用を示すことが報告されている。 S. chirata の総抽出物は Jute semilooper に対して有意な抗飛行虫活性を示した。 O-グリコシドであるNorswertianolinは、抗結核活性をもたらすことが報告されている。 S. purpurascensのO-配糖体は、アルビノラットやマウスで中枢神経抑制作用を示すことが知られている。 Mammea americana のキサントンは、sarcoma 180 腫瘍細胞に対して阻害活性を示した。 Swertia chirayita のヘキサン画分から単離された 1,8-Dihydroxy-3,5-dimethoxyxanthone (swerchirin) は、絶食、摂食、ブドウ糖負荷、トルブタミド前処理したアルビノラットで非常に大きな血糖低下作用があることが判明した。 CF雄のアルビノラットで経口投与した場合、40％の血糖値低下効果は23.1mg/kgであった。 Swertia種はまた、必須元素の存在について調査されている。 キサントン類は、肝保護作用、抗菌作用、抗発癌作用、抗ハンセン病作用、抗酸化作用、抗コリン作用、変異原性、放射線防護作用、免疫調節作用、抗骨吸収作用、抗寄生虫作用、ノイラミニダーゼ阻害作用、抗マラリア、抗補体、抗真菌、殺藻、抗HIV作用が報告されている。 と心臓保護、抗腫瘍、抗菌、抗糖尿病、抗高脂血症、抗動脈硬化、免疫調整、抗炎症、抗潰瘍、抗ウイルス、抗真菌、抗糖尿病。 高脂血症、鎮痛、喘息、抗ヒスタミン、抗アモエビ、利尿、止瀉、殺幼虫、殺卵、抗原虫、抗レプトスパイラル、抗TMV、抗がん活性。 S. mussotiiのキサントンはHepG 2.2.15細胞株で抗B型肝炎ウイルス活性を評価され、IC50値が0.01 mMから0.13 mMでB型肝炎ウイルスDNA複製を阻害する有意な活性を示した. キサントンの生合成

生合成のキサントンはシキメイトとアセテート由来の混合物である（図1）。 このようにシキメイトから生成されたフェニルアラニンは側鎖から2個の炭素原子を失い、酸化されてm-ヒドロキシ安息香酸を生成する。 これが3ユニットの酢酸（マロン酸経由）と結合して中間体ができる。 シキミ酸-酢酸中間体は閉環して置換ベンゾフェノンとなり、酸化的フェノールカップリングによりキサントン部分の中心環が生成される。 この酸化的カップリングは、ベンゾフェノンが潜在的なB環のヒドロキシル置換基に対してオルト位またはパラ位のどちらで折り畳まれるかによって2通り起こり、それぞれ1，3，5-トリヒドロキシキサントン（1）または1，3，7-置換類似体ゲンチシン（2）を与えることができる。 このように、中間体の向きに応じて、2つの異なる水酸化パターンが見いだされる。 この経路は、Gentiana luteaを用いた実験により証明されている。

14Cラベルしたフェニルアラニンを植物に与えると、B環のみにラベルが回収された（図1）。 逆に14C標識した酢酸を与えると主要部分がA環に取り込まれた。 最近、Centaurium erythraeaの培養細胞において、(1)に代わる閉環が起こることが示された。2,3′,4,6-tetrahydroxybenzophenoneは、1,3,5-トリヒドロキシキサントンへの前駆体である . さらに、これらの細胞培養物では、化合物（1）がキサントン6-ヒドロキシラーゼによって選択的に酸化され、1，3，5，6-テトラヒドロキシキサントンが生成される。 また、Sousa and Pintoによって、単純な酸素化キサントンの合成法が報告されている。

Conflict of Interests

著者は、この論文の発表に関して利害関係がないことを宣言している。

謝辞

著者らは、インド、ウッタラカンド州スリナガルのHNBガルワール大学、科学部長のディレクターHRDIと教授M. S. M. Rawatに感謝している。