Description générale

Les particules lentivirales dCas9-VP64 prêtes à l’emploi permettent la transduction immédiate d’une large gamme de lignées cellulaires. Les particules lentivirales dCas9-VP64 intègrent de manière efficace et stable dCas9-VP64 et la cassette de résistance à la blasticidine liée par un peptide 2A et pilotée par le promoteur EF1 alpha (EF1a-dCas9-VP64-2A-Blasticidin) pour une forte expression dans les lignées cellulaires en division et non en division. Ils sont idéaux pour éviter le processus fastidieux de production de lentivirus et font partie d’un système CRISPR à trois parties avec dCas9-VP64 individuel. MS2-p65-HSF1 et des vecteurs d’expression gRNA.
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Application

Validation de la génomique fonctionnelle/cible
– Criblage génétique direct impartial
– Forte activation transcriptionnelle dans de multiples lignées cellulaires
– Création de lignées cellulaires exprimant de manière stable dCas9-VP64.

Caractéristiques et avantages

– Hautement spécifique et hautement actif
– Particules lentivirales de haute pureté et de haut titre vérifiées par la séquence
– Activation des gènes par activation transcriptionnelle plutôt que par surexpression basée sur l’ADNc
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Principe

Les systèmes CRISPR/Cas sont employés par les bactéries et les archées comme défense contre les virus et les plasmides envahissants. Récemment, le système CRISPR/Cas de type II de la bactérie Streptococcus pyogenes a été modifié pour fonctionner dans des systèmes eucaryotes en utilisant deux composants moléculaires : une seule protéine Cas9 et un ARN guide non codant (ARNg). L’endonucléase Cas9 peut être rendue inactive (dCas9) par des mutations des deux domaines protéiques, RuvC et HnH (respectivement D10A et H840A), qui sont responsables de l’activité de la nucléase. La protéine déficiente en nucléase peut ensuite être fusionnée avec l’activateur de transcription VP64 et utilisée conjointement avec un ARN guide modifié avec des aptamères d’ARN MS2 qui fonctionnent pour recruter les coactivateurs de transcription supplémentaires p65 et HSF1. Le complexe SAM assemblé est ensuite utilisé comme un système de livraison de cargaison aux promoteurs de gènes cibles, permettant l’activation transcriptionnelle spécifique au site du gène d’intérêt.

Définition de l’unité

VP/mL est l’unité de mesure de concentration pour le titre viral estimé par le test p24.