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Caractérisation moléculaire de xynX , un gène codant pour une xylanase multidomaine avec un domaine thermostabilisateur de Clostridium thermocellum

Un gène de Clostridium thermocellum, xynX, codant pour une xylanase a été cloné et la séquence nucléotidique complète a été déterminée. Le gène de la xylanase de Clostridium thermocellum consiste en un ORF de 3261 nucléotides codant pour une xylanase (XynX) de 1087 résidus d’acides aminés (116 kDa). L’analyse des séquences de XynX a montré une structure multidomaine composée de quatre domaines différents : un domaine thermostabilisateur N-terminal homologue aux séquences trouvées dans plusieurs enzymes thermophiles, un domaine catalytique homologue aux glycosyl hydrolases de la famille 10, un domaine de liaison à la cellulose (CBD) dupliqué homologue aux CBD de la famille IX, et un domaine homologue à la couche S tripliquée. Un mutant de délétion de xynX n’ayant que la région catalytique a produit une enzyme mutante XynX-C qui a conservé l’activité catalytique mais perdu la thermostabilité. En termes de demi-vie à 70 °C, la thermostabilité de XynX-C était environ six fois inférieure à celle de l’autre enzyme mutante, XynX-TC, produite par un mutant contenant à la fois le domaine thermostabilisateur et le domaine catalytique. La température optimale de XynX-C était environ 5-10 °C inférieure à celle de XynX-TC.