TY – JOUR

T1 – Base structurelle de la liaison du substrat dans WsaF, une rhamnosyltransférase de Geobacillus stearothermophilus

AU – Steiner, Kerstin

AU – Hageluken, Gregor

AU – Messner, Paul

AU – Schaeffer, Christina

AU – Naismith, James Henderson

PY – 2010/3/26

Y1 – 2010/3/26

N2 – Les polymères de glucides sont importants sur le plan médical et industriel. La couche S de nombreux organismes Gram-positifs comprend des polymères de protéines et d’hydrates de carbone et forme un réseau presque paracristallin à la surface des cellules. Ce réseau est non seulement important pour les bactéries, mais il peut également être utilisé pour la fabrication de polysaccharides et de glycoconjugués importants sur le plan commercial. Le glycan de la glycoprotéine de la couche S de Geobacillus stearothermophilus NRS 2004/3a est principalement composé d’unités répétitives de trois sucres de rhamnose liés par des liaisons alpha-1,3, alpha-1,2 et bêta-1,2. La formation de la liaison bêta-1,2 est catalysée par l’enzyme WsaF. L’utilisation rationnelle de ce système est entravée par le fait que WsaF et les autres enzymes de la voie partagent très peu d’homologie avec d’autres enzymes. Nous rapportons la caractérisation structurelle et biochimique de WsaF, la première rhamnosyltransférase de ce type à être caractérisée. Le travail structurel a été facilité par la méthode de réduction de l’entropie de surface. L’enzyme possède deux domaines, le domaine N-terminal, qui lie l’accepteur (la chaîne de rhamnane en croissance), et le domaine C-terminal, qui lie le substrat (dTDP-beta-L-rhamnose). La structure de WsaF liée au dTDP et au dTDP-beta-L-rhamnose couplée à une analyse biochimique identifie les résidus qui sous-tendent la catalyse et la reconnaissance du substrat. Nous avons construit et testé par mutagenèse dirigée un modèle de reconnaissance de l’accepteur. (C) 2010 Elsevier Ltd. Tous droits réservés.

AB – Les polymères glucidiques sont importants sur le plan médical et industriel. La couche S de nombreux organismes Gram-positifs comprend des polymères de protéines et d’hydrates de carbone et forme un réseau presque paracristallin à la surface de la cellule. Ce réseau est non seulement important pour les bactéries, mais il peut également être utilisé pour la fabrication de polysaccharides et de glycoconjugués importants sur le plan commercial. Le glycan de la glycoprotéine de la couche S de Geobacillus stearothermophilus NRS 2004/3a est principalement composé d’unités répétitives de trois sucres de rhamnose liés par des liaisons alpha-1,3, alpha-1,2 et bêta-1,2. La formation de la liaison bêta-1,2 est catalysée par l’enzyme WsaF. L’utilisation rationnelle de ce système est entravée par le fait que WsaF et les autres enzymes de la voie partagent très peu d’homologie avec d’autres enzymes. Nous rapportons la caractérisation structurelle et biochimique de WsaF, la première rhamnosyltransférase de ce type à être caractérisée. Le travail structurel a été facilité par la méthode de réduction de l’entropie de surface. L’enzyme possède deux domaines, le domaine N-terminal, qui lie l’accepteur (la chaîne de rhamnane en croissance), et le domaine C-terminal, qui lie le substrat (dTDP-beta-L-rhamnose). La structure de WsaF liée au dTDP et au dTDP-beta-L-rhamnose couplée à une analyse biochimique identifie les résidus qui sous-tendent la catalyse et la reconnaissance du substrat. Nous avons construit et testé par mutagenèse dirigée un modèle de reconnaissance de l’accepteur. (C) 2010 Elsevier Ltd. Tous droits réservés.

KW – Structure cristalline

KW – Geobacillus stearothermophilus

KW – Rhamnosyltransférase

KW – Glycosylation des protéines de la couche S

KW – Biosynthèse des glycanes des glycoprotéines

KW -. Mannosyltreansferase pima

KW – Glycogène-Synthase

KW – Données de diffraction

KW – Groupement de gènes

KW – Famille GT4

KW – Glycosyltransférases

KW – Catalyse

KW – Séquence

UR – http://www.scopus.com/inward/record.url?scp=77349090654&partnerID=8YFLogxK