Las benzodiacepinas se observan con frecuencia en las muestras enviadas para las pruebas de drogas de los pacientes, las personas involucradas en casos de bienestar infantil, las pruebas de drogas en el lugar de trabajo, así como en las agresiones facilitadas por las drogas. Se dispone de pocos estudios experimentales previos sobre la excreción de benzodiacepinas en la orina y en los fluidos orales. El objetivo de este estudio fue investigar las concentraciones de diazepam y alprazolam en el fluido oral y en la orina hasta 2 semanas después de la ingestión de una única dosis oral en voluntarios sanos. Un total de 11 voluntarios sanos ingirieron 10 mg de diazepam al inicio del estudio y 0,5 mg de alprazolam el día 3 del estudio. Se recogieron un total de 10 muestras de fluidos orales y 17 muestras de orina de cada participante. Las muestras se analizaron mediante los métodos de cromatografía líquida con espectroscopia de masas en tándem y cromatografía líquida de rendimiento ultra alto con espectrometría de masas en tándem. La mediana del tiempo de detección fue de 252 h para el metabolito de diazepam más largo detectado en la orina (oxazepam, rango 203-322) y de 132 h en el fluido oral (N-desmetildiazepam, rango 109-136). Para el alprazolam, la mediana del tiempo de detección fue de 36 h (metabolito α-OH-alprazolam, rango 26-61) en orina y 26 h (alprazolam, rango 4-37) en fluido oral. Estos resultados muestran que los tiempos de detección son sólo de 36 h para el alprazolam en orina tras la ingesta de una única dosis terapéutica oral. Para el diazepam en orina, los tiempos de detección fueron de 11 días. Los tiempos de detección fueron generalmente más cortos en el fluido oral en comparación con la orina. Los resultados podrían ser útiles en la interpretación de los hallazgos de diazepam o alprazolam en los casos de pruebas de drogas que incluyan orina o fluidos orales.