Descripción general

Las partículas lentivirales dCas9-VP64 listas para usar permiten la transducción inmediata de una amplia gama de líneas celulares. Las partículas lentivirales dCas9-VP64 integran de forma eficiente y estable dCas9-VP64 y el casete de resistencia a la blasticidina unido por un péptido 2A y dirigido por el promotor EF1 alfa (EF1a-dCas9-VP64-2A-Blasticidina) para una fuerte expresión tanto en líneas celulares en división como en no división. Son ideales para evitar el tedioso proceso de producción de lentivirus y son una parte de un sistema CRISPR de tres partes con dCas9-VP64 individuales. MS2-p65-HSF1 y vectores de expresión de gRNA.
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Aplicación

Genómica funcional/Validación de dianas
– Cribado genético directo imparcial
– Fuerte activación transcripcional en múltiples líneas celulares
– Creación de líneas celulares que expresan dCas9-VP64 de forma estable.

Características y ventajas

– Altamente específico y altamente activo
– Partículas lentivirales de alta pureza y alto título verificadas por la secuencia
– Activa genes a través de la activación transcripcional en lugar de la sobreexpresión basada en el ADNc
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Principio

Los sistemas CRISPR/Cas son empleados por bacterias y arqueas como defensa contra virus y plásmidos invasores. Recientemente, el sistema CRISPR/Cas de tipo II de la bacteria Streptococcus pyogenes ha sido diseñado para funcionar en sistemas eucariotas utilizando dos componentes moleculares: una única proteína Cas9 y un ARN guía no codificante (ARNg). La endonucleasa Cas9 puede volverse inactiva (dCas9) con mutaciones en los dos dominios de la proteína, RuvC y HnH (D10A y H840A respectivamente), que son responsables de la actividad de la nucleasa. La proteína deficiente en nucleasa puede entonces fusionarse con el activador transcripcional VP64 y utilizarse junto con un ARN guía modificado con aptámeros de ARN MS2 que funcionan para reclutar a los coactivadores transcripcionales adicionales p65 y HSF1. El complejo SAM ensamblado se utiliza entonces como un sistema de entrega de carga a los promotores de los genes objetivo, lo que permite la activación transcripcional específica del sitio del gen de interés.

Unidad Definición

VP/mL es la unidad de medida de concentración para el título viral estimado por el ensayo p24.