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Caracterización molecular de xynX, un gen que codifica una xilanasa multidominio con un dominio termoestabilizador de Clostridium thermocellum

Se clonó un gen de Clostridium thermocellum, xynX, que codifica una xilanasa y se determinó la secuencia nucleotídica completa. El gen de la xilanasa de Clostridium thermocellum consiste en un ORF de 3261 nucleótidos que codifica una xilanasa (XynX) de 1087 residuos de aminoácidos (116 kDa). El análisis de la secuencia de XynX mostró una estructura multidominio que consistía en cuatro dominios diferentes: un dominio termoestabilizador N-terminal homólogo a las secuencias encontradas en varias enzimas termófilas, un dominio catalítico homólogo a las glucosil hidrolasas de la familia 10, un dominio de unión a la celulosa (CBD) duplicado homólogo a los CBD de la familia IX, y un dominio homólogo a la capa S triplicada. Un mutante de deleción de xynX que sólo tiene la región catalítica produjo una enzima mutante XynX-C que conservó la actividad catalítica pero perdió la termoestabilidad. En términos de vida media a 70 °C, la termoestabilidad de XynX-C era unas seis veces menor que la de la otra enzima mutante, XynX-TC, producida por un mutante que contenía tanto el dominio termoestabilizador como el dominio catalítico. La temperatura óptima de XynX-C era unos 5-10 °C más baja que la de XynX-TC.