TY – JOUR

T1 – Base estructural de la unión de sustrato en WsaF, una ramnosiltransferasa de Geobacillus stearothermophilus

AU – Steiner, Kerstin

AU – Hageluken, Gregor

AU – Messner, Paul

AU – Schaeffer, Christina

AU – Naismith, James Henderson

PY – 2010/3/26

Y1 – 2010/3/26

N2 – Los polímeros de carbohidratos son importantes desde el punto de vista médico e industrial. La capa S de muchos organismos Gram-positivos comprende polímeros de proteínas y carbohidratos y forma un conjunto casi paracristalino en la superficie celular. Esta matriz no sólo es importante para las bacterias, sino que también tiene una aplicación potencial en la fabricación de polisacáridos y glucoconjugados de importancia comercial. El glicano de la capa S de Geobacillus stearothermophilus NRS 2004/3a se compone principalmente de unidades repetitivas de tres azúcares de ramnosa unidas por enlaces alfa-1,3-, alfa-1,2- y beta-1,2-. La formación del enlace beta-1,2 es catalizada por la enzima WsaF. El uso racional de este sistema se ve dificultado por el hecho de que WsaF y otras enzimas de la vía comparten muy poca homología con otras enzimas. En este trabajo se presenta la caracterización estructural y bioquímica de WsaF, la primera rhamnosiltransferasa caracterizada. El trabajo estructural se vio favorecido por el método de reducción de entropía superficial. La enzima tiene dos dominios, el dominio N-terminal, que se une al aceptor (la cadena de ramano en crecimiento), y el dominio C-terminal, que se une al sustrato (dTDP-beta-L-ramnosa). La estructura de WsaF unida a dTDP y dTDP-beta-L-ramnosa, junto con el análisis bioquímico, identifica los residuos que subyacen a la catálisis y al reconocimiento del sustrato. Hemos construido y probado mediante mutagénesis dirigida al sitio un modelo para el reconocimiento del aceptor. (C) 2010 Elsevier Ltd. Todos los derechos reservados.

AB – Los polímeros de carbohidratos son importantes desde el punto de vista médico e industrial. La capa S de muchos organismos Gram-positivos está compuesta por polímeros de proteínas y carbohidratos y forma un conjunto casi paracristalino en la superficie celular. Esta matriz no sólo es importante para las bacterias, sino que también tiene una aplicación potencial en la fabricación de polisacáridos y glucoconjugados de importancia comercial. El glicano de la capa S de Geobacillus stearothermophilus NRS 2004/3a se compone principalmente de unidades repetitivas de tres azúcares de ramnosa unidas por enlaces alfa-1,3-, alfa-1,2- y beta-1,2-. La formación del enlace beta-1,2 es catalizada por la enzima WsaF. El uso racional de este sistema se ve dificultado por el hecho de que WsaF y otras enzimas de la vía comparten muy poca homología con otras enzimas. En este trabajo se presenta la caracterización estructural y bioquímica de WsaF, la primera rhamnosiltransferasa caracterizada. El trabajo estructural se vio favorecido por el método de reducción de entropía superficial. La enzima tiene dos dominios, el dominio N-terminal, que se une al aceptor (la cadena de ramano en crecimiento), y el dominio C-terminal, que se une al sustrato (dTDP-beta-L-ramnosa). La estructura de WsaF unida a dTDP y dTDP-beta-L-ramnosa, junto con el análisis bioquímico, identifica los residuos que subyacen a la catálisis y al reconocimiento del sustrato. Hemos construido y probado mediante mutagénesis dirigida al sitio un modelo para el reconocimiento del aceptor. (C) 2010 Elsevier Ltd. All rights reserved.

KW – Estructura cristalina

KW – Geobacillus stearothermophilus

KW – Rhamnosiltransferasa

KW – Glicosilación de proteínas de la capa S

KW – Biosíntesis de glicanos de glicoproteínas

KW – Mannosiltreansferasa pima

KW – Glucógeno-Sintasa

KW – Datos de difracción

KW – Grupo de genes

KW – Familia GT4

KW – Glicosiltransferasas

KW – Catálisis

KW – Secuencia

UR – http://www.scopus.com/inward/record.url?scp=77349090654&partnerID=8YFLogxK